وصفنا بعض النقاط التي تهمنا ، ونتوقع أنه عندما بدأنا هذه التحليلات ، من metagenomics إلى الكيمياء الحالية ، كان لدينا العديد من الأسئلة ولم نبحث إلا عن إجابات ... مع النتائج الأولى لدينا المزيد من الأسئلة وقبل كل شيء المخاوف!

يعتبر البحث النوعي الكمي للمركبات العضوية ذا أهمية كبيرة في المجال الدوائي. هناك مشاكل محتملة تتعلق بالسلامة ناتجة عن عمليات الإنتاج الجديدة والخصائص الهيكلية والبيولوجية المعقدة للمنتجات.

يتبع ذلك تم العثور على ما يلي في اللقاح:

• التلوث الكيميائي من عملية التصنيع أو من التلوث المتبادل مع خطوط الإنتاج الأخرى
• السموم الكيميائية
• سموم الببتيد البكتيرية
• جزيء كبير غير قابل للذوبان وعسر الهضم يتفاعل مع اختبار البروتين ولكن لا يتم التعرف عليه بواسطة قواعد بيانات البروتين

وجود:

• مستضدات البروتين لأكسدة الدفتيريا ، الكزاز ، السعال الديكي ، التهاب الكبد B ، المستدمية النزلية ب ، شلل الأطفال 1-2-3
• الفورمالديهايد وغلوتارالدهيد ، فينوكسييثانول ، بقايا المضادات الحيوية المشار إليها في التكوين

هناك ستة مستضدات موجودة في لقاح Infanrix Hexa: ذيفانات الكزاز ، الدفتيريا والسعال الديكي ، مستضدات D لفيروسات شلل الأطفال الثلاثة ، البروتينات التي تم الحصول عليها بواسطة الهندسة الوراثية للالتهاب الكبد الوبائي وعديد السكاريد في المستدمية الكيميائية. كما الناقل. لتكوين مواد سامة ، من الضروري علاج الفورمالديهايد وغلوتارالدهايد الذي يجب أن يسمح بالتخلص من السمية مع الحفاظ على قدرتها على تحفيز الأجسام المضادة الواقية ضد السموم الأصلية.

ما توقعنا العثور عليه هو المواد السامة الثلاثة والمستضدات الأخرى التي لم يتم تعديلها عن طريق علاجات الفورمالديهايد والغلوتارالدهيد ، ويمكن فصلها عن بعضها البعض وهضمها بواسطة الإنزيم المحدد للبروتينات (التربسين). بدلاً من ذلك ، تم العثور على بوليمر حقيقي ، غير قابل للذوبان وعسر الهضم ، يتكون من مجموعة من المستضدات المرتبطة كيميائيًا (يتم تعريفها في حالة وجودها كمجموع من المستضدات الفردية أو جزيء منفرد) ، والتي توجد معلومات عنها أيضًا في الأدبيات الخاصة بـ مستضدات الفردية. ^1-2
لم يتم التعرف على هذا الجزيء بشكل كبير بواسطة قواعد بيانات البروتين ، وبالتالي تبين في الواقع أنه مركب صلب ذو بنية كيميائية غير معروفة.

تعد قابلية ذوبان البروتينات وإمكانية هضمها (أي تقطيعها إلى أجزاء صغيرة من الببتيد) هما السمتان النموذجيتان للبروتينات ، التي تسمح لنا بعدم دراستها بطرق تحليل البروتينات ولكن أيضًا فهي شرط ضروري للتفاعل مع الجهاز المناعي لتشكيل أجسام مضادة واقية، لأنه إذا تم تعديل بنية البروتين بشكل عميق مقارنةً بالبروتين الأصلي ، فإن الأجسام المضادة التي يتم تكوينها تختلف تمامًا عن تلك القادرة على مهاجمة المستضدات الأصلية التي تسبب الأمراض.

نظرًا لأن هذا البوليمر الذي صادفناه ، والمستمد من مزيج المستضدات ، لا يختلف فقط عن وجهة نظر التشكل المكاني ، بل إنه يختلف عن وجهة النظر الكيميائية ، يمكننا أن نقول أننا لسنا في وجود مستضدات مماثلة لتلك المستضدات الأصلية ولكن لمركب مع سمية وفعالية غير معروفة وغير متوقعة.

بالإضافة إلى حقيقة أن مستضدات اللقاح لم يتم اكتشافها فعليًا ، تم العثور على 65 إشارة من الملوثات الكيميائية ، 35٪ منها معروفة ، أي ، تم التعرف عليها بالمقارنة مع قواعد البيانات ؛ من بين هذه العوامل ، نجد العديد من مخلفات المعالجة ، والتلوث المتقاطع من خطوط الإنتاج الأخرى ، والتي سيتم التحقق منها في التحليل التحليلي من المستوى الثاني (أي بمعايير التحكم).

ومن بين هذه الإشارات ، تم تحديد 7 سموم كيميائية، ربما يكون مصدره عملية معالجة المستضد أو من عمليات إنتاج أخرى موجودة في موقع إنتاج اللقاح ؛ يبدو أن هذه السموم التي لم يتم تحديدها بعد بوضوح في التركيب مشتقة جزئياً من تفاعل الفورمالديهايد ، وغلوتارالدهيد ، وبروميد السيانوجين مع الملوثات الكيميائية الأخرى الموجودة في اللقاح. تم التأكيد على أن معظم هذه السموم لها سمية ثابتة ومنتشرة في Pubchem ³ أو Toxnet ⁴ e تشكل مشكلة أمنية كبيرة.

نتجت العديد من الببتيدات الحرة (أي الأجزاء القصيرة من سلاسل الأحماض الأمينية) ذات الأصل البكتيري عن دراسة البروتين والكسور الببتيد ، والتي تأتي بالتالي من خلايا البكتريا المزروعة لاستخراج المستضدات. وذكرت الببتيدات البكتيرية في الأدب والمواد المثيرة للحساسية المحتملة ⁵ وقادرة على إحداث ردود فعل المناعة الذاتية ⁶ وهذه تشكل أيضا أ مسألة السلامة التي ستحتاج إلى توضيح مع الهيئات التنظيمية.

العودة إلى الركنين الأساسيين اللذين جعلنا نبدأ مسار التحليل هذا ونعيد التأكيد على المفهوم الذي عبر عنه مقابلة حديثة في المجلة العلمية المرموقة Nature: نحن نبحث عن فعالية وسلامة اللقاحات وفي الواقع من الصعب أن نفهم كيف يمكن القول أن هذا اللقاح قادر على تشكيل أجسام مضادة واقية ضد الأمراض الستة التي نحمي أنفسنا و من الأصعب فهم كيف يمكن إثبات أن هذه الكتلة ليست سامة عند الرضع لأنها مسألة 6 مولدات مضادة للسمية العصبية مرتبطة ببعضها.

إن سداسي سداسي التكافؤ Infanrix ، للأسلوب الذي قمنا بتكليفه ، يترك الكثير من الشكوك حول فعاليته وسلامة ...

نؤكد لكم شيئًا واحدًا: لن نتوقف.

 تنزيل: CORVELVA-تقرير-تحليل التركيب الكيميائي-Infanrix-Hexa.pdf

المراجع

1. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2017 1 يونيو ؛ 1054: 80-92 - الاستخدام المشترك للأدوات التحليلية لاستكشاف هياكل ذيفان التيتانوس وكزاز ذوفان الكزاز.
2. لقاح. 2007 مارس 8 ؛ 25 (12): 2213-27. - التحقيق في آلية إزالة السموم من سم الكزاز المعالج بالفورمالديهايد.
3. https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/search/
4. https://toxnet.nlm.nih.gov/
5. إنت J ميد ميكروبيول. 2018 أغسطس ؛ 308 (6): 738-750. - البحث عن مسببات الحساسية البكتيرية.
6. الجبهة Microbiol. 2017 9 أكتوبر ؛ 8: 1938 - تشير التتابعات المهووسة إلى محاكاة جزيئية بين الببتيدات الميكروبية والمستضدات الذاتية: إمكانية التحريض على المناعة الذاتية.

تعمّق

يحتوي لقاح Infanrix Hexa على التركيب التالي ، نسخت بأمانة من ورقة البيانات التقنية الحالية ورقة بيانات الشركة المصنعة:

إن تحضير المستضد الموضح أدناه هو ذلك الموضح في تقرير EMA للحصول على تفويض التسويق لـ Infanrix Hexa. ¹

ذوفان الخناق: يتم الحصول على ذيفان الدفتريا عن طريق تثبيط التوكسين (الذي ينتج عن ذيفان الخناق) مع الفورمالديهايد عند 37 درجة مئوية في بيئة قلوية قليلاً ، ثم يتم امتصاصه على أملاح الألومنيوم (هيدروكسيد وفوسفات)

ذوفان الكزاز: يتم الحصول على ذوفان الكزاز بنفس الإجراء الذي يحدث به ذيفان الخناق (كلوستريديوم تيتاني هو بكتيريا ملتهمة لاذقية اللاهوائية وينتج عن التيتانوسباسمين ، وهو توكسين عصبي يعمل على منع المشابك التي تحول دون تقلص العضلات المنعكسة)

توكسين سهمي: يتم الحصول على مكونات لقاح السعال الديكي اللاخلوي عن طريق استخلاص وتنقية مزارع المرحلة الأولى من بورديتيلا بيرتوسيس (بكتريا بكتيرية هوائية ، قادرة على إنتاج أربعة أنواع من السموم: سم السعال الديكي ، ذيفان الحلقات الغدية ، التوكسين الجلدي الناخر ، القصبة الهوائية ونوعين من عديدات السكاريد الدهنية ؛ لتحضير اللقاح اللاخلوي ، يتم تنقية واستخدام سم السعال الديكي فقط) ، يليه إزالة السموم نهائيًا من سم السعال الديكي من خلال العلاج بالجلوتارالدهيد والفورمالديهايد والعلاج بالفورمالديهايد من مكونات الهيماجلوتينين الخيطية والبيرتاكتين ؛ ثم يتم إمتصاص المكونات المختلفة على أملاح الألومنيوم.

مستضد التهاب الكبد B السطحي: يتم إنتاجه من ثقافات Saccharomyces cerevisiae المعدلة وراثيا التي تشفر جين مستضد السطح الرئيسي لفيروس التهاب الكبد B ؛ يتم تنقية هذا المستضد من خلال العديد من الخطوات الفيزيائية والكيميائية ويتجمع تلقائيًا في جزيئات كروية يبلغ قطرها حوالي 20 نانومتر تحتوي على مستضد متعدد الببتيد ومصفوفة فوسفورية. ثم يتم امتصاص هذا المستضد على فوسفات الألومنيوم.

فيروس شلل الأطفال (غير نشط): يعتمد لقاح سالك ، أو شلل الأطفال المعطل (IPV) ، على ثلاث سلالات مرجعية برية وخبيثة: ماهوني (فيروس شلل الأطفال من النوع 1) ، و MEF-1 (فيروس شلل الأطفال من النوع 2) ، وساوكيت (فيروس شلل الأطفال من النوع 3) ، المزروعة في خط خلايا VERO: هو خط خلوي خالد تم الحصول عليه في عام 1962 من كليتي القرود الأفريقية البالغة (الفرفت) ؛ لإنتاج اللقاح ، تخضع الخلايا لممرات انتشار 130-140 ، (مستوى انتشار منخفض) ، يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن أكثر من 200 ممر يصبح خط الخلية مسرطناً في الفئران ؛ إن وسط الاستزراع لنمو خط VERO من أصل حيواني (وبالتالي يجب اختباره بحثًا عن وجود فيروسات وبريونات ملوثة) ، بينما يتم استخدام المتوسط ​​199 لنمو الفيروس ، والذي لا يحتوي على مواد من أصل حيواني. بعد عزل الفيروسات الحية وتنقيتها ، يتم إبطال مفعولها بالفورمالديهايد.
من المعروف عن طريق EMA ، لا يحتوي اللقاح على الفيروسات على هذا النحو ، ولكن البروتينات التي تنتجها السلالات الثلاثة ، المسماة Antigen D ؛ تتشكل هذه البروتينات قبل العلاج بفورمالدهايد وغلوتارالدهايد الذي يعمل على تعطيل نشاط السموم وتدمير جميع المواد الوراثية ، التي تأتي من خلايا فيرو ، التي يحتمل أن تكون مسرطنة ، ولكن أيضًا من فيروسات شلل الأطفال.

السكاريد المستدمية النزلية من النوع ب: يتم تحضيره من السلالة البكتيرية Hib 20,752،6 (توجد سلالات غير كبسولة وغير قابلة للكتابة ، وكبسولات ، تتميز عن مستضد في XNUMX أنواع مختلفة تسميها حروف الأبجدية من a إلى f. الإصابات الأكثر شيوعًا والأقل خطورة التي تسببها Hib تلك التي تؤثر على الجهاز التنفسي العلوي ، وعادة ما تدعمها كبسولات غير كبسولة ، والالتهابات الغازية ، مثل التهاب السحايا ، تسببها كبسولات الكبسولة ، خاصة النوع ب)
يتم الحصول على عديد السكاريد من نمو السلالة البكتيرية في وسط استنبات اصطناعي وبعد التنشيط باستخدام بروميد السيانوجين واشتقاقه باستخدام فاصل هيدرازيد-أديبيك يقترن بتوكسويد التيتانوس عن طريق تكثيف الكرباميد ؛ بعد التنقية ، يتم امتصاص الممتزجة على أملاح الألمنيوم ثم يتم تجميدها في وجود اللاكتوز كمثبت. يعتبر الاقتران مع ذوفان الكزاز ضروريًا لإعطاء مولد المضاد للسكاريد لأنه يغير السكاريد من المستضد المستقل لـ T إلى المستضد المعتمد على T.

المنتج النهائي: يتم خلط المركزات المعقمة الممتصة على الألومنيوم من DT و PT و FHA و PRN و HBsAg والمكون ثلاثي التكافؤ من IPV بمحلول معقم من كلوريد الصوديوم والماء للحقن وتضاف بمحلول معقم من الفينوكسي إيثانول.
2- الفينوكسي إيثانول هو عامل مضاد للميكروبات ويضاف إلى المنتج النهائي لأن التعقيم النهائي عن طريق ترشيح مكون DTPa-HBV-IPV غير ممكن وأن بقع التعليق قد يخفي التلوث الميكروبي.