Bericht über die bisherigen Ergebnisse (März 2019)

Bericht über die bisherigen Ergebnisse (März 2019)

Wir wollen gemeinsam mit Ihnen Bilanz ziehen. Seit Juli 2018 sind acht Monate vergangen, und in dieser Zeit haben wir äußerst zufriedenstellende Ergebnisse erzielt. Wir haben ein Forschungsprogramm vorgestellt, und in Bezug auf die Impfstoffanalyse können wir einen Bezugspunkt herstellen, wobei die erreichten Ziele, die endgültigen und die erst jetzt geplanten Ziele berücksichtigt werden.

Zunächst wurden die Analysen von 2 Verbindungen für jeden Impfstoff mittels Standards unter Verwendung zertifizierter Kontrollstandards mit einer Konzentration in der Größenordnung von Mikrogramm / ml verifiziert. Die Verbindungen, die wir ausgewählt haben, gehören zu denen, die für ihr kritisches Gefahrenprofil bekannt sind. Wir sprechen von einer kumulativen Menge, einer Gesamtmenge der als Identität erkannten und zu identifizierenden Personen, die im Gegensatz zu den EMA / FDA-Richtlinien in der Größenordnung von 50 Mikrogramm / ml geschätzt werden kann.

Diese Tests haben zu positiven Ergebnissen geführt und bestätigen die Analysemethode voll und ganz! Die beobachteten Kontaminationen sind wahrscheinlich auf unterschiedliche und unterschiedliche Phänomene und Themen des Herstellungsprozesses zurückzuführen. Was im Verlauf der Studien beobachtet wurde, ist eine "chargenweise" Variation der Zusammensetzung, was uns davon ausgehen lässt, dass es einige Schritte entlang des gesamten Produktherstellungsprozesses gibt, die schwer zu kontrollieren sind.


Solche Analysen haben uns die folgenden Schritte ermöglicht:

  • Konformitätsbewertung der Zusammensetzung gemäß Datenblatt des Impfstoffs
  • Screening auf chemische und Protein / Peptid-Kontaminationen sowie solche, die aus genetischem Material stammen
  • Bestätigungsstudie von chemischen und Protein-Zielverbindungen mit Standard-Inspektionszertifikaten

Die folgenden Impfstoffe wurden einem ersten Screening unterzogen:

  • Infanrix Hexa - GlaxoSmithKline Biologicals sa
  • Priorix Tetra - GlaxoSmithKline SpA
  • Hexyon - Sanofi Pasteur Europa
  • Gardasil 9 - MSD-Impfstoffe

Diese anderen Impfstoffe wurden als erstes Screening analysiert:

  • Masern-Lebendimpfstoff BP - Poonawalla Group (Profarma AG, Baar)
  • MMR vax Pro - MSD Vaccins, Frankreich
  • PolioInfanrix - GlaxoSmithKline, Belgien
  • Fluad - Seqirus Srl, Siena
  • Vivotif - PaxVax, Vereinigtes Königreich

Verwendete Technologien

Die Studie ist gegliedert in:

Analyse von Verunreinigungen sowie chemischen und Proteinkontaminationen

  • Das mit der wegweisenden SANIST-Plattform verbundene LC-SACI / ESI-MS-Analysesystem wurde verwendet, um ein erstes Identifizierungsscreening der interessierenden Impfstoffe durchzuführen und es mit den Kontrollstandards zu bestätigen, wobei ein Mindestniveau zwischen den Nanogrammen und festgelegt wurde Mikrogramm / Dosis
  • Die MALDI-TOF-MS-Technologie wurde verwendet, um die in den Impfstoffen gefundenen unlöslichen Makromoleküle zu untersuchen

Analyse von genetischem Material

  • Test auf das Vorhandensein von Nukleinsäuren (DNA / RNA) menschlichen und tierischen Ursprungs und von Mikroorganismen (Viren, Bakterien) mit der Next Generation Sequencing-Methode, die es ermöglichte, die in den Impfstoffen enthaltene genetische Materialsequenz hochspezifisch zu quantifizieren und genaue Weise
  • Überprüfung der Übereinstimmung von Bakterien und lebenden abgeschwächten und inaktivierten Impfviren mit genomischen Sequenzen (Vorhandensein genetischer Varianten)

Quantitative Analyse von Metallen

  • Die ICP-MS-Technologie ermöglichte die Quantifizierung der in den Impfstoffen enthaltenen Metalle mit einer Mindestgrenze von 5 ng / Dosis.

Analyse der chemischen und Proteinkontamination

Nach einem ersten Screening, bei dem das Vorhandensein von Hunderten von chemischen Signalen in den Impfstoffen festgestellt worden war, wurden Bestätigungstests mit Hilfe von Standards für 2 Verbindungen pro Impfstoff durchgeführt, wobei zertifizierte Kontrollstandards verwendet wurden, die aus den für ihr kritisches Gefahrenprofil und für die Impfstoffe bekannten ausgewählt wurden Restmenge (z. B. als Bestandteil der Impfstoffe zu betrachten, daher in das technische Datenblatt aufzunehmen und zu quantifizieren).

Diese Tests haben zu positiven Ergebnissen geführt und bestätigen die Analysemethode voll und ganz. Bisher wurden nur zwei Verbindungen ausschließlich aus wirtschaftlichen Gründen getestet. Tatsächlich ist diese Studie nicht vollständig, da sie durch die erheblichen Kosten der Umfrage begrenzt ist. Wir haben uns jedoch dafür entschieden, die relevanteren Standards für die behördlichen Beschränkungen zu ermitteln Denken Sie daran, dass diese Art der eingehenden Untersuchung doch nicht an uns liegen sollte.

Die beobachteten Kontaminationen sind höchstwahrscheinlich auf unterschiedliche und unterschiedliche Phänomene und Themen des Herstellungsprozesses zurückzuführen. Was wir bei den Forschungsschritten beobachtet haben, ist eine Variation der Zusammensetzung zwischen den Chargen, was uns davon ausgehen lässt, dass es einige schwer zu kontrollierende Schritte entlang des gesamten Produktherstellungsprozesses gibt. Unter Berücksichtigung der üblichen analytischen Faktoren kann davon ausgegangen werden, dass die Die Konzentration liegt in der Größenordnung von Mikrogramm / ml. Für die kumulierte Menge kann auf der Grundlage einer halbquantitativen Bewertung (da die meisten Verbindungen unbekannt sind) geschätzt werden, dass die Verunreinigungen in der Größenordnung von 50 μg / ml liegen. Dies sind wichtige Daten, da die EMA / FDA-Richtlinien diesbezüglich sehr klar sind. Kontaminationen sollten nicht vorhanden sein (unterhalb der Nachweisgrenze) oder, falls vorhanden, gut identifiziert sein, und es sollte nachgewiesen werden, dass geeignete Methoden zu ihrer Verringerung angewendet werden. In diesem Fall liegen die Verunreinigungen nicht unter dem Fähigkeitsniveau des Nachweisgeräts (ng / ml), sodass wir der Ansicht sind, dass der Hersteller keine Reinigungsmethoden anwendet. Was das Vorhandensein von zufälligen Viren betrifft, besteht das Problem nicht, da diese überhaupt nicht vorhanden sein dürfen.

  • IN PROGRESS - Derzeit werden laborübergreifende Bestätigungsanalysen dieser Verbindungen durchgeführt.
    Die durch Standard identifizierten Verbindungen werden von verschiedenen Labors mit der gleichen Technologie erneut bestätigt. Eines unserer Ziele ist es, dieses Projekt auch mit Unterstützung und Kooperation internationaler Verbände zu koordinieren.

  • IN PROGRESS - Untersuchung der Fällungskinetik aluminiumgebundener Antigene.

Metagenomische Analyse

  • IN PROGRESS - Analyse mit zusätzlichen DNA- und RNA-Kontrollstandards einer anderen Impfstoffcharge.
    Von Beginn dieses Projekts an war uns klar, dass die Analysen, um die notwendigen Anforderungen an die Reproduzierbarkeit und Datengenauigkeit zu erfüllen, mit den fortschrittlichsten Instrumenten durchgeführt werden mussten und alle Unterschiede innerhalb derselben Charge und zwischen verschiedenen zu überwachen waren Chargen. Während wir mit den Untersuchungen fortfahren, werden andere Lose fortlaufend analysiert, offensichtlich unter Berücksichtigung des Budgets und der Verfügbarkeit der Produkte.

  • IN PROGRESS - Sequenzanalyse des fetalen DNA-Genoms aus der MRC-5-Zelllinie.
    Seit dem ersten Screening hatten wir die Möglichkeit, standardmäßig zu überprüfen, ob die verwendeten diploiden Linien MRC-5 waren, wie im technischen Datenblatt angegeben. Wir möchten das Studium dieser Zelllinie auch dadurch vertiefen, dass ihre Anwesenheit in Menge und Dimension bemerkenswert ist.

  • IN PROGRESS - Untersuchung kleinerer Varianten (Quasispezies) von Masern, Mumps und Röteln.
    Im Vergleich zum ersten Bericht im Juli 2018 (https://bit.ly/2UCC2iS) Wir haben eine eingehende Untersuchung der Nebenvarianten in Auftrag gegeben, da nicht nur Mutationen in abgeschwächten Impfviren gefunden wurden. Auch dieses Problem wirft erhebliche Zweifel an der Wirksamkeit und Sicherheit des Impfstoffs auf. Dieses Ergebnis nimmt mehr Zeit in Anspruch als die anderen Berichte, da die Überprüfung der Mutantensequenzen manuell durchgeführt werden muss.

  • IN PROGRESS - Laborübergreifende Bestätigungsanalyse
    Wir haben ausländische und nationale Laboratorien identifiziert, für die wir die standardmäßige Replikation der Analyse in Auftrag gegeben haben. Dieses Ergebnis wird in Kürze verfügbar sein.

Projekte in Evaluation

Untersuchung der Wirksamkeit von Impfstoffantigenen: Diese Untersuchung muss in einem von den Aufsichtsbehörden für die präklinische Untersuchung von Impfstoffen akkreditierten Zentrum durchgeführt werden. Ziel ist es zu überprüfen, ob die Impfstoffantigene in der Lage sind, spezifische Antikörper zu produzieren oder an diese zu binden (theoretisch wird angenommen, dass diese Antikörper schützend sind, aber diese Analyse erlaubt uns nicht den Nachweis, dass der Impfstoff in der Lage ist, gegen die Krankheit zu schützen). Die Kosten dieses Schritts könnten relevant sein, daher ist das Projekt derzeit nur eine Hypothese.


Herunterladen: CORVELVA-Report-on-the-Ergebnisse-obtained.pdf


Übersetzt vom CLiVa-Team - www.clivatoscana.com