Abschließender technischer Bericht - Analyse des molekularen Profils von Impfstoffen

Abschließender technischer Bericht - Analyse des molekularen Profils von Impfstoffen
(Lesezeit: 3 - 6 Minuten)

Vorwort

Zunächst möchten wir uns bei den sehr nützlichen Kommentaren bedanken, die diejenigen abgegeben haben, die sich die Ergebnisse der Analysen angesehen haben, die im Rahmen wissenschaftlicher Forschungstätigkeiten in Bezug auf die Produkte Priorix tetra und Infanrix Hexa durchgeführt wurden. Die aufgedeckten kritischen Punkte waren in der Tat sehr nützlich, um technisch-wissenschaftliche Integrationen hinzuzufügen, mit denen die geleistete Arbeit geklärt werden konnte. Wir glauben, dass nur durch eine gesunde Verbindung von wissenschaftlichen Visionen Schlussfolgerungen zu den erhaltenen Daten gezogen werden können, die für die gesamte wissenschaftliche Gemeinschaft und für die Menschen, die sich an sie wenden, nützlich sein können.


1. Stand der Technik

Die an den Produkten Priorix Tetra und Infanrix Hexa durchgeführten Voruntersuchungen (Screening ohne Bestätigung) des biomolekularen, metabolomischen und proteomischen Profils haben zu einem Zusammensetzungsbild geführt, das in den folgenden Punkten zusammengefasst ist:

  1. Vorhandensein verschiedener analytischer Signale, die bei der Suche in Metlin-Datenbanken nicht mit bekannten Verbindungen in Verbindung gebracht werden können 1-2 und KEGG 3. Daher ergab sich ein Bild, das mit einer erheblichen Komplexität bei der Zusammensetzung von Handelsprodukten verbunden war.
  2. Vorhandensein von nicht deklarierten Proteinen in der Packungsbeilage des Produkts Priorix Tetra. Letzteres kann möglicherweise mit Rückständen aus dem Produktionsprozess in Verbindung gebracht werden
  3. Kein Nachweis der im Infanrix Hexa-Produkt deklarierten Antigene. Die Analysetechnik bestand aus einem enzymatischen Verdau mit Trypsin, der mit Massenspektrometrietechniken verbunden war. 4-5

Diese Daten brachten mehrere Kommentare hervor, insbesondere zu Punkt C - Der Nachweis von Proteinen erfolgt nach einem seit über 10 Jahren international anerkannten Standardansatz 4Verdauung durch das Enzym Trypsin 4. Die so erhaltenen Peptide werden chromatographisch aufgetrennt und massenspektrometrisch analysiert 4-5. Die Hauptbeobachtung bezog sich auf die Tatsache, dass Impfstoffe Adjuvansverbindungen auf Aluminiumbasis enthalten, die möglicherweise den enzymatischen Verdauungsprozess hemmen könnten.

Die später erhobenen Daten ermöglichten eine inhaltliche Klärung, insbesondere in Bezug auf die unter Buchstabe c festgestellten Streitigkeiten.


2. Neue Erkenntnisse und Analysen

2.1 Weitere Informationen zur Analyse des Infanrix Hexa-Produkts

Bevor mit der Darstellung der neu gewonnenen Daten zu den Impfstoffen gegen Hexyon und Gardasil 9 fortgefahren wird, muss unbedingt die Frage beantwortet werden, die dem Zweifel an der Hemmung der proteolytischen Aktivität von Trypsin durch das Vorhandensein von Hilfsstoffen auf Aluminiumbasis innewohnt. im Infanrix Hexa-Impfstoff. In diesem Zusammenhang muss angegeben werden, dass im tryptischen Gärrest immer eine Aufschlusskontrolle vorhanden ist. Tatsächlich hat das zur Durchführung des Aufschlusses verwendete Trypsin, obwohl es zum Zwecke der Verhinderung der Autolyse konstruiert wurde, einen geringen Prozentsatz des letzteren, was im Falle der enzymatischen Aktivität zur Gewinnung des Fragments mit m / z 842 und der folgenden Peptidsequenz führt : VATVSLPR. Dieses Fragment wurde tatsächlich im tryptischen Digestat des Infanrix Hexa-Produkts nachgewiesen, was durch das Ionenextraktions-Chromatogramm nachweisbar ist (Abbildung 1).

abschlussbericht analyse abb1

Abbildung 1: Ionenextraktions-Chromatogramm in Verbindung mit dem Ion im m / z-Verhältnis 842, das in der Probe für die Charge des Infanrix Hexa-Produkts (Chargennummer A21CD072D) ermittelt wurde.

Zusätzlich wird eine externe Überprüfung durch Verdauung von Hämoglobin durchgeführt, um die Güte der verwendeten Trypsincharge weiter zu überprüfen. Hämoglobin, das im Analyseabschnitt analysiert wurde, in dem das Produkt überwacht wurde, wurde mit einem signifikanten statistischen Score (loge <-100) erkannt. Diese Daten ermöglichten es, die Tatsache zu bestätigen, dass die Enzymaktivität vorhanden war.


2.2 Neue Analysen zu Hexyon- und Gardasil-Produkten

Die Analyse der Hexyon- und Gardasil 9-Produkte führte zum Nachweis komplexer Molekülprofile. In diesem Fall wurde jedoch das Vorhandensein der meisten in der Packungsbeilage angegebenen Antigene nachgewiesen. Sie wurden durch Arbeiten durch tryptische Verdauung und in Gegenwart von Adjuvantien nachgewiesen. Diese Tatsache verstärkt weiter den Beweis, dass die tryptische Verdauungsreaktion in Gegenwart von Adjuvantien nicht gehemmt wird.

Im Fall der Hexyon- und Gardasil 9-Impfstoffe wurde die Komplexität des Molekularprofils hauptsächlich auf das Vorhandensein zahlreicher Spezies mit niedrigem Molekulargewicht zurückgeführt, die über die Metlin-Referenzdatenbanken nicht identifizierbar waren 1-2 und KEGG 3.


3. Schlussfolgerungen und abschließende Überlegungen

Die durchgeführten Analysen führten zu folgendem Ergebnis:

  1. Das molekulare Profil der analysierten Impfstoffe ist im Allgemeinen komplex und weitgehend unbekannt.
  2. Es gibt Proteinkontaminationen, die nicht in der Packungsbeilage angegeben sind und deren Zusammensetzung unterschiedlich ist.
  3. In mehreren Fällen wurden die in der Packungsbeilage angegebenen Antigene nicht nachgewiesen. Diese Tatsache kann auf mehrere Faktoren zurückgeführt werden. Unter den letzteren können wir die Empfindlichkeit der verwendeten Methode betrachten. Wir sind jedoch der Meinung, dass wir das Phänomen der Hemmung der Verdauung aufgrund des Vorhandenseins von Adjuvantien in der Impfstoffformulierung ausschließen können. Tatsächlich wird die enzymatische Aktivität hauptsächlich durch die Anwesenheit der tryptischen Autolysefragmente in den Lösungen der verdauten Impfstoffe (interne Kontrolle) bestätigt.

4. Zukünftige Studien

Weitere Studien werden im Rahmen der Forschungs- und Entwicklungsaktivitäten durchgeführt, um folgende Aspekte zu untersuchen:

  1. makromolekulare Zusammensetzung in Verbindung mit festen Rückständen in Impfstoffen (MALDI-TOF-MS-Analyse); 5
  2. Bewertung der Konzentration der in den Produkten enthaltenen Metalle.
  3. Analyse der zweiten Ebene zur Bestätigung des Vorhandenseins toxischer Verbindungen, die in der Screeningphase nachgewiesen wurden. Ihre Konzentration hängt daher von ihrer Toxizität gemäß den Angaben in den internationalen Sicherheitsdatenblättern ab. Die Analysen der zweiten Ebene werden in Übereinstimmung mit der europäischen Richtlinie EU 2002/657 / EG durchgeführt, um hohe Qualitätsstandards im Massenspektrometriesektor zu gewährleisten. 6

im Glauben
d.ssa Loretta Bolgan


5. Literaturhinweise

  1. Autenhahn R., Cho K., Uritboonthai W., Zhu Z., Patti G., Siuzdak G. (September 2012). "Ein beschleunigter Workflow für nicht zielgerichtete Metabolomik mithilfe der METLIN-Datenbank". Naturbiotechnologie. 30: 826–828. doi: 10.1038 / nbt.2348. PMC 3666346. PMID 22965049.
  2. Smith CA, I'Maille G, Want EJ, Qin C, Trauger SA, Brandon TR, Custodio DE, Abagyan R, Siuzdak G (Dezember 2005). "METLIN: eine Metaboliten-Massenspektraldatenbank" (PDF). Ther Drug Monit. 27 (6): 747–51. doi: 10.1097 / 01.ftd.0000179845.53213.39. PMID 16404815.
  3. Kanehisa M (2013). "Chemische und genomische Evolution enzymkatalysierter Reaktionsnetzwerke". FEBS Lett. 587 (17): 2731–7.
  4. Cristoni S, Bernardi LR. "Bioinformatik in der massenspektrometrischen Datenanalyse für Proteomics-Studien." Expert Rev Proteomics. 2004 Dec; 1 (4): 469 & ndash; 83.
  5. Cristoni S, Bernardi LR. "Entwicklung neuer Methoden für die massenspektrometrische Untersuchung bioorganischer Makromoleküle." Mass Spectrom Rev. 2003 Nov-Dec; 22 (6): 369 & ndash; 406.
  6. Cristoni S., Dusi G., Brambilla P., Albini A., Conti M., Brambilla M., Bruno A., Di Gaudio F., Ferlin L., Tazzari V., Mengozzi S., Barera S., Sialer C., Trenti T., Cantu M., Rossi Bernardi L., Noonan DM. "SANIST: Optimierung einer Technologie zur Identifizierung von Verbindungen auf der Grundlage der EU-Richtlinie mit Anwendungen in der forensischen, pharmazeutischen und Lebensmittelanalytik." J. Mass Spectrom. 2017 Jan; 52 (1): 16-21. doi: 10.1002 / jms.3895.

Herunterladen: CORVELVA-Report-Technik-Finale.pdf