Bericht über die bisherigen Ergebnisse (März 2019)

Bericht über die bisherigen Ergebnisse (März 2019)

Wir wollen gemeinsam mit Ihnen Bilanz ziehen. Von Juli 2018 bis heute sind 8 Monate vergangen und in diesen Monaten haben wir äußerst zufriedenstellende Ergebnisse erzielt. Wir haben eine Forschungsprogramm und in Bezug auf die Analyse von Impfstoffen können wir einen ersten Punkt in Bezug auf die erreichten Ziele, die in der Abschlussphase und die noch in der Planungsphase befindlichen, machen.

Wir beginnen dieses Update mit der Feststellung, dass die standardmäßigen Analysen von 2 Verbindungen für jeden Impfstoff unter Verwendung zertifizierter Kontrollstandards mit einer Konzentration in der Größenordnung von Mikrogramm / ml bestätigt wurden. Die Verbindungen, die wir ausgewählt haben, gehören zu denen, die für ihr kritisches Gefahrenprofil bekannt sind. Wir sprechen von einer kumulativen Menge, d. H. Insgesamt zwischen den als Identität bestätigten und den zu identifizierenden Mengen, die im Gegensatz zu den EMA / FDA-Richtlinien in der Größenordnung von 50 Mikrogramm / ml geschätzt werden kann.

Diese Bestätigungen ergaben positive Ergebnisse, daher bestätigen sie die Analysemethode vollständig! Die beobachteten Verunreinigungen sind wahrscheinlich auf Phänomene und Variablen zurückzuführen, die mit dem Herstellungsprozess verbunden sind. Was während der Studien beobachtet wurde, ist eine langfristige Variation dieser Zusammensetzung, die zu der Annahme führt, dass es Prozesse gibt, die innerhalb des Gesamtprozesses der Verarbeitung des Produkts schwer zu kontrollieren sind.


Die durchgeführten Analysen ermöglichten den Abschluss folgender Schritte:

  • Bewertung der Konformität der Zusammensetzung gemäß Impfstoffdatenblatt
  • Screening von chemischen, Protein / Peptid- und genetischen Materialkontaminationen
  • Bestätigungsstudie von Zielverbindungen (chemisch und Protein) mit zertifizierten Kontrollstandards

Die folgenden Impfstoffe wurden "vollständig" analysiert:

  • Infanrix Hexa - GlaxoSmithKline Biologicals sa
  • Priorix Tetra - GlaxoSmithKline SpA
  • Hexyon - Sanofi Pasteur Europa
  • Gardasil 9 - MSD-Impfstoffe

Diese anderen Impfstoffe wurden als erstes Screening analysiert:

  • Masern-Lebendimpfstoff BP - Poonawalla Group (Profarma AG, Baar)
  • MMR vax Pro - MSD Vaccins, Frankreich
  • PolioInfanrix - GlaxoSmithKline, Belgien
  • Fluad - Seqirus Srl, Siena
  • Vivotif - PaxVax, Vereinigtes Königreich

Verwendete Technologien

Die Studie war gegliedert in:

Analyse von Verunreinigungen sowie chemischen und Proteinkontaminationen

  • Das mit der innovativen SANIST-Plattform verbundene LC-SACI / ESI-MS-Analysesystem wurde sowohl zur Durchführung eines ersten Identifikationsscreenings der interessierenden Impfstoffe als auch zur Bestätigung mit den Kontrollstandards mit einer Mindestgrenze zwischen den Nanogrammen und verwendet Mikrogramm / Dosis
  • Die MALDI-TOF-MS-Technologie wurde verwendet, um die in Impfstoffen vorhandenen unlöslichen Makromoleküle zu untersuchen

Genetische Materialanalyse

  • Nachweis des Vorhandenseins von Nukleinsäuren (DNA / RNA) menschlichen und tierischen Ursprungs sowie von Mikroorganismen (Viren, Bakterien) mit der Next-Generation-Sequenzierungsmethode, mit der die Sequenz des in den Impfstoffen enthaltenen genetischen Materials auf hochspezifische und genaue Weise quantifiziert werden konnte geprüft

Quantitative Analyse von Metallen

  • Die ICP-MS-Technologie hat es ermöglicht, die in Impfstoffen enthaltenen Metalle mit einer Mindestgrenze von 5 ng / Dosis zu quantifizieren.

Analyse von chemischen und Proteinkontaminationen

Nach einem ersten Screening, das Hunderte von chemischen Signalen in den Impfstoffen identifizierte, Bestätigungen wurden unter Verwendung von Standard-2-Verbindungen pro Impfstoff durchgeführtunter Verwendung zertifizierter Kontrollstandards, die aus jenen ausgewählt werden, die für ihr kritisches Gefahrenprofil und ihre Restmenge bekannt sind (so dass sie als Bestandteile der Impfstoffe angesehen werden können, daher in das technische Datenblatt aufzunehmen und zu quantifizieren sind).

Diese Bestätigungen ergaben positive Ergebnisse, daher bestätigen sie die Analysemethode vollständig. Bisher wurden sie aus rein wirtschaftlichen Gründen nur an zwei Verbindungen durchgeführt. Diese Studie erhebt keinen Anspruch auf Vollständigkeit, da sie durch die erheblichen Kosten der Umfrage begrenzt ist. Wir haben uns jedoch dafür entschieden, die Standards zu ermitteln, die die größten Auswirkungen auf regulatorische Beschränkungen haben, und es ist auch richtig, dass diese Art der eingehenden Untersuchung liegt bei uns.

Die beobachteten Verunreinigungen sind wahrscheinlich auf Phänomene und Variablen zurückzuführen, die mit dem Herstellungsprozess verbunden sind. Was während der Studien beobachtet wurde, ist eine langfristige Variation dieser Zusammensetzung, die zu der Annahme führt, dass es Prozesse gibt, die innerhalb des Gesamtprozesses der Verarbeitung des Produkts schwer zu kontrollieren sind. Unter Berücksichtigung der üblichen analytischen Faktoren kann davon ausgegangen werden, dass die Konzentration in der Größenordnung von Mikrogramm / ml liegt. Für die kumulierte Menge kann auf der Grundlage einer halbquantitativen Bewertung (da die meisten Verbindungen nicht bekannt sind) geschätzt werden, dass die Verunreinigungen in der Größenordnung von 50 μg / ml liegen. Dies ist wichtig, da die EMA / FDA-Richtlinie diesbezüglich eindeutig ist. Kontaminationen dürfen nicht vorhanden sein (unterhalb der Nachweisgrenze) oder müssen gut charakterisiert sein und nachweislich geeignete Methoden anwenden, um sie so weit wie möglich zu reduzieren. In unserem Fall liegen die gefundenen Verunreinigungen nicht unter der Nachweisgrenze des Instruments (ng / ml) und daher wendet der Hersteller unserer Meinung nach keine Reinigungsmethoden an. Was das Vorhandensein von zufälligen Viren betrifft, besteht das Problem nicht, da diese vollständig fehlen müssen.

  • IN PROGRESS - Die laborübergreifenden Bestätigungsanalysen dieser Verbindungen werden durchgeführt.
    Die durch Standards identifizierten Verbindungen werden mit der gleichen Technologie in anderen Labors erneut bestätigt. Wir haben uns unter anderem zum Ziel gesetzt, dieses Vorgehen auch durch die Unterstützung internationaler Verbände zu koordinieren.
  • IN PROGRESS - Untersuchung der Fällungskinetik aluminiumgebundener Antigene.

Metagenomische Analyse

  • IN PROGRESS - Analyse mit zusätzlichen DNA- und RNA-Kontrollstandards einer anderen Charge pro Impfstoff.
    Von Beginn dieses Projekts an war uns klar, dass die Analysen, um die notwendigen Anforderungen an die Wiederholbarkeit und Genauigkeit der Daten zu erfüllen, mit fortschrittlichen Instrumenten durchgeführt und alle Unterschiede zwischen und zwischen verschiedenen Chargen überwacht werden mussten. Während wir mit den Untersuchungen fortfahren, werden andere Chargen kontinuierlich analysiert, natürlich beschränkt auf die Kosten und die Verfügbarkeit der Produkte.
  • IN PROGRESS - Sequenzanalyse des fetalen DNA-Genoms aus der MRC-5-Zelllinie.
    Bereits beim ersten Screening hatten wir die Möglichkeit, standardmäßig zu bestätigen, dass die verwendeten diploiden Linien MRC-5 waren, wie im Datenblatt angegeben. Wir wollen das Studium dieser Zelllinie auch dadurch vertiefen, dass sie in erheblichen Mengen und von absolut erheblicher Größe vorliegt.
  • IN PROGRESS - Untersuchung kleinerer Varianten (Quasispezies) von Masern, Mumps und Röteln.
    Im Vergleich zum ersten Bericht vom Juli 2018 (https://goo.gl/cSspVH) Wir haben die eingehende Untersuchung der Nebenvarianten in Auftrag gegeben, da nicht nur Mutationen abgeschwächter Impfviren gefunden wurden. Dieses Element wirft auch enorme Zweifel an der Wirksamkeit und Sicherheit des Impfstoffs auf. Das Ergebnis wird länger dauern als die anderen Berichte, da die Überprüfung der Sequenzen der verschiedenen Mutanten manuell erfolgen muss.
  • IN PROGRESS - Laborübergreifende Bestätigungsanalyse
    Wir haben ausländische und nationale Laboratorien identifiziert, bei denen wir die standardmäßige Replikation der Analysen in Auftrag gegeben haben. Dieses Ergebnis wird in Kürze verfügbar sein.

Projekte in Evaluation

Untersuchung der Wirksamkeit von Impfstoffantigenen: Diese Untersuchung muss in einem von den Aufsichtsbehörden für die präklinische Untersuchung von Impfstoffen akkreditierten Zentrum durchgeführt werden. Ziel ist es zu überprüfen, ob die Impfstoffantigene in der Lage sind, spezifische Antikörper zu produzieren oder an diese zu binden (theoretisch wird angenommen, dass diese Antikörper schützend sind, aber diese Analyse erlaubt nicht den Nachweis, dass der Impfstoff in der Lage ist, vor der Krankheit zu schützen). Die Kosten für diesen Schritt könnten beträchtlich sein, daher ist das Projekt vorerst hypothetisch.


Herunterladen: CORVELVA-report-of-Ergebnisse-ottenuti.pdf