Virus adventicios y de rubéola en el lote Priorix Tetra A71CB256A

En la fase de detección para la evaluación de las contaminaciones e impurezas de la vacuna Priorix Tetra, surgieron varios problemas críticos: el primero fue la no detección del virus de la rubéola con el nivel de secuencia utilizado; Dado que este resultado planteó la duda de que podría ser un error para el procedimiento utilizado, el nivel de secuenciación se ha incrementado significativamente para alcanzar una profundidad muy alta (260 millones de secuencias producidas). El virus de la rubéola se detectó así en 114 copias, equivalentes al 0.00004% de las secuencias totales y mediante una lectura manual de las secuencias fue posible eliminar cualquier fuente de error del software utilizado y confirmar definitivamente la presencia de rubéola en la muestra.

Sin embargo, este procedimiento también permitió identificar los virus adventicios presentes en un número bajo de copias, y lo que hemos visto es que el número de copias de los virus adventicios excedió el número de copias de rubéola. De modo que surgieron otros dos problemas importantes sin resolver:

1. ¿La rubéola presente en la vacuna es suficiente para producir un efecto inmunogénico o puede considerarse por debajo del umbral (es decir, como una contaminación accidental)?
2. ¿Están realmente presentes los virus adventicios? Si es así, ¿pueden ser peligrosos?

Con respecto al punto 1) Podemos cuestionar fuertemente la capacidad del virus de la rubéola atenuada para actuar como un antígeno inmunogénico debido al número insignificante de copias y la atenuación que debilita aún más su eficacia, por lo que podemos considerarlo a todos los efectos como un contaminante por debajo del umbral

Con respecto al punto 2) La lista de virus adventicios detectados por cribado reveló una gran cantidad de virus, luego de la comparación con las secuencias depositadas en las bases de datos oficiales, cuya identificación podría haber sido atribuida erróneamente por el software que los clasificó, debido a la incertidumbre relacionada con el número muy bajo. de copias. Fue necesaria una verificación manual uno a uno para confirmar su presencia mediante un software diferente (BLAST) y así fue posible confirmar la presencia de los siguientes retrovirus contaminantes:

Se sabe que estos virus son contaminantes adventicios de la vacuna y también se conoce su peligro potencial, razón por la cual los fabricantes deben verificar su ausencia completa en la vacuna.

Se deduce que de este análisis en profundidad de esta vacuna se confirman dos no conformidades en cuanto a eficacia y seguridad:

• La presencia en un número muy bajo de copias (subliminal) de rubéola
• La presencia de virus adventicios potencialmente peligrosos.

En cuanto a la confirmación de los rastros de otros genomas encontrados en los datos de RNA-seq como 'virus bacterianos y ambientales no clasificados', incluidas secuencias de fagos, 'virus dsRNA' y 'virus de ARN no clasificados ShiM-2016' que incluye genomas virales poco conocidos, un Es necesario un análisis adicional en profundidad para demostrar la asignación correcta y la presencia efectiva. La presencia del virus de la hepatitis B NO fue confirmada por el análisis BLAST.

A continuación hay una tabla que resume lo que se describe en el texto:

* Confirmado manualmente por el software BLAST

Descargar: Análisis en profundidad de CORVELVA de secuencias de virus y virus de la rubéola Priorix-Tetra.pdf

Traducido por el equipo de CLiVa - www.clivatoscana.com