Informe sobre los resultados obtenidos hasta ahora (marzo de 2019)

Informe sobre los resultados obtenidos hasta ahora (marzo de 2019)

Queremos hacer un balance de la situación junto con usted. Han pasado ocho meses desde julio de 2018 y en este período de tiempo hemos logrado resultados extremadamente satisfactorios. Hemos presentado un programa de investigación y, con respecto al análisis de vacunas, podemos hacer un punto de referencia, con los objetivos alcanzados, los finalizados y los solo planificados por ahora.

Para comenzar, los análisis de 2 compuestos para cada vacuna se han verificado mediante estándares, utilizando estándares de control certificados con una concentración del orden de microgramos / ml. Los compuestos que hemos elegido se encuentran entre los conocidos por su perfil de riesgo crítico. Estamos hablando de una cantidad acumulativa, una cantidad total de las reconocidas como identidades y las que se deben identificar, que pueden estimarse dentro del orden de 50 microgramos / ml, en contraste con las pautas de EMA / FDA.

¡Estas pruebas han dado resultados positivos, por lo tanto, confirman completamente el método de análisis! Las contaminaciones observadas se deben probablemente a fenómenos y temas diferentes y variables del proceso de fabricación. Lo que se ha observado en el curso de los estudios es una variación "inter-lotes" de la composición, lo que nos hace suponer que hay algunos pasos a lo largo del proceso de fabricación del producto que son difíciles de controlar.


Tales análisis nos han permitido lograr los siguientes pasos:

  • Evaluación de la conformidad de la composición como se describe en la hoja de datos de la vacuna
  • Detección de contaminaciones químicas y de proteínas / péptidos, así como las derivadas de material genético.
  • Estudio confirmatorio de compuestos químicos y proteicos a través de certificados de inspección estándar.

Las siguientes vacunas han sido sometidas a un examen inicial:

  • Infanrix Hexa - GlaxoSmithKline Biologicals sa
  • Priorix Tetra - GlaxoSmithKline SpA
  • Hexyon - Sanofi Pasteur Europa
  • Gardasil 9 - Vacunas MSD

Estas otras vacunas se analizaron como detección inicial:

  • Vacuna contra el sarampión viva BP - Grupo Poonawalla (Profarma AG, Baar)
  • MMR vax Pro - Vacunas MSD, Francia
  • PolioInfanrix - GlaxoSmithKline, Bélgica
  • Fluad - Seqirus Srl, Siena
  • Vivotif - PaxVax, Reino Unido

Tecnologías usadas

El estudio está estructurado en:

Análisis de impurezas y contaminación química y proteica.

  • El sistema de análisis LC-SACI / ESI-MS asociado con la plataforma SANIST pionera se ha utilizado para realizar una detección de identificación inicial de las vacunas de interés, así como para confirmarlo con los estándares de control, con un nivel mínimo entre los nanogramos y microgramos / dosis
  • La tecnología MALDI-TOF-MS se ha utilizado para estudiar las macromoléculas insolubles que se encuentran en las vacunas.

Análisis de material genético.

  • Pruebe la presencia de ácidos nucleicos (ADN / ARN) de origen humano y animal y de microorganismos (virus, bacterias) utilizando el método de secuenciación de próxima generación, que permitió cuantificar la secuencia del material genético contenido en las vacunas en una forma altamente específica y forma precisa
  • Verificación de la correspondencia de bacterias y secuencias genómicas de virus vivos vacunados atenuados e inactivados (presencia de variantes genéticas)

Análisis cuantitativo de metales.

  • La tecnología ICP-MS permitió cuantificar los metales presentes en las vacunas con un límite mínimo de 5 ng / dosis.

Análisis de contaminación química y proteica.

Después de un primer examen que identificó la presencia de cientos de señales químicas dentro de las vacunas, se llevaron a cabo pruebas de confirmación mediante estándares de 2 compuestos por vacuna, utilizando estándares de control certificados, elegidos entre aquellos conocidos por su perfil de riesgo crítico y cantidad no residual (como para ser considerados componentes de las vacunas, por lo tanto, para ser incluidos en la hoja de datos técnicos y cuantificados).

Estas pruebas han dado resultados positivos, por lo tanto, confirman completamente el método de análisis. Hasta ahora, solo dos compuestos han sido probados únicamente por razones económicas, de hecho, este estudio no está completo ya que está limitado por el considerable costo de la encuesta, pero hemos elegido identificar los estándares más relevantes en cuanto a las restricciones regulatorias y es para Tenga en cuenta que este tipo de investigación en profundidad no debería ser nuestra responsabilidad.

Las contaminaciones observadas se deben probablemente a fenómenos y temas diferentes y variables del proceso de fabricación. Lo que hemos observado a lo largo de los pasos de la investigación es una variación entre lotes de la composición, lo que nos hace suponer que hay algunos pasos a lo largo del proceso de fabricación del producto que son difíciles de controlar. Teniendo en cuenta los factores analíticos habituales, se puede suponer que el la concentración es del orden de microgramos / ml. En cuanto a la cantidad acumulada, es posible estimar sobre la base de una evaluación semicuantitativa (ya que la mayoría de los compuestos son desconocidos) que los contaminantes están dentro del orden de 50 μg / ml. Esta es una información importante porque las pautas de EMA / FDA son muy claras al respecto. Las contaminaciones no deben estar presentes (por debajo del nivel de detección) o, si están presentes, deben estar bien identificadas y se debe demostrar que los métodos apropiados para reducirlas están aplicados. En este caso, los contaminantes no están por debajo del nivel de capacidad del dispositivo de detección (ng / ml), por lo que creemos que el productor no está aplicando ningún método de purificación. En cuanto a la presencia de virus adventicios, el problema no existe, porque no deben estar presentes en absoluto.

  • EN CURSO: se están realizando análisis de confirmación entre laboratorios de estos compuestos.
    Los compuestos identificados por el estándar serán reconfirmados con la misma tecnología por diferentes laboratorios. Uno de nuestros objetivos es coordinar este proyecto también con el apoyo y la cooperación de asociaciones internacionales.

  • EN CURSO - Estudio de la cinética de precipitación de antígenos unidos a aluminio.

Análisis metagenómico

  • EN CURSO: análisis con estándares adicionales de control de ADN y ARN de otro lote de vacunas.
    Desde el comienzo de este proyecto, nos quedó claro que los análisis, para cumplir con los requisitos necesarios de replicabilidad y precisión de datos, debían llevarse a cabo con la instrumentación más avanzada y monitoreando cualquier diversidad dentro del mismo lote y entre diferentes lotes. A medida que avanzamos en las investigaciones, se analizan continuamente otros lotes, obviamente con el presupuesto y la disponibilidad de productos.

  • EN CURSO - Análisis de secuencia del genoma de ADN fetal de la línea celular MRC-5.
    Desde el primer examen, tuvimos la oportunidad de verificar por estándar que las líneas diploides utilizadas eran MRC-5, como se indica en la hoja de datos técnicos. Nos gustaría profundizar el estudio de esta línea celular también en virtud del hecho de que su presencia es notable en cantidad y dimensiones.

  • EN CURSO - Estudio de variantes menores (quasiespecies) de virus de sarampión, paperas y rubéola.
    En comparación con el primer informe en julio de 2018 (https://bit.ly/2UCC2iS) hemos encargado un estudio en profundidad de las variantes menores, ya que las mutaciones en los virus vacunales atenuados no fueron las únicas encontradas. Este problema también plantea dudas importantes sobre la eficacia y seguridad de la vacuna. Este resultado llevará más tiempo que los otros informes porque la verificación de las secuencias de los mutantes debe hacerse manualmente.

  • EN CURSO - Análisis de confirmación interlaboratorio
    Hemos identificado laboratorios extranjeros y nacionales a los que hemos encargado la replicación del análisis por estándar. Este resultado estará disponible pronto.

Proyectos bajo evaluación

Estudio de la potencia de los antígenos de la vacuna: este estudio debe realizarse en un centro acreditado por las agencias reguladoras para el estudio preclínico de las vacunas. El objetivo es verificar si los antígenos de la vacuna pueden producir o unirse a anticuerpos específicos (en teoría se supone que estos anticuerpos son protectores, pero este análisis no nos permite demostrar que la vacuna puede proteger contra la enfermedad). El costo de este paso podría ser relevante, por lo que el proyecto actualmente es solo una hipótesis.


Descargar: CORVELVA-Informe-on-the-resultados-obtained.pdf


Traducido por el equipo de CLiVa - www.clivatoscana.com