Prefacio

En primer lugar, nos gustaría agradecer los comentarios muy útiles proporcionados por quienes han visto los resultados de los análisis, realizados en el contexto de las actividades de investigación científica, relacionados con los productos Priorix tetra e Infanrix Hexa. Los problemas críticos expuestos fueron, de hecho, muy útiles para agregar integraciones técnico-científicas capaces de aclarar el trabajo realizado. Creemos que solo a través de una sana comunión de visiones científicas se puede llegar a conclusiones sobre los datos obtenidos que pueden ser útiles para toda la comunidad científica y para las personas que recurren a ella.

1. Estado del arte

Los estudios preliminares (cribado no sujeto a confirmación) del perfil biomolecular, metabólico y proteómico, realizados en los productos Priorix Tetra e Infanrix Hexa han llevado a una imagen de composición resumida en los siguientes puntos:

1. Presencia de diferentes señales analíticas que no pueden asociarse con compuestos conocidos a través de búsquedas en bases de datos Metlin ^{1 - 2} y KEGG ³. Por lo tanto, surgió una imagen asociada con una considerable complejidad en la composición de productos comerciales.
2. Presencia de proteínas no declaradas en el prospecto en el producto Priorix Tetra. Este último puede estar asociado potencialmente con residuos del proceso de producción.
3. No detección de los antígenos declarados dentro del producto Infanrix Hexa. La técnica de análisis consistió en la digestión enzimática con tripsina asociada con técnicas de espectrometría de masas. ^{4 - 5}

Estos datos generaron varios comentarios, especialmente con respecto al punto C - De hecho, la detección de proteínas se lleva a cabo utilizando un enfoque estándar, reconocido internacionalmente por más de 10 años. ⁴digestión a través de la enzima tripsina ⁴. Los péptidos así obtenidos se separan cromatográficamente y se analizan por espectrometría de masas. ^{4 - 5}. La observación principal fue inherente al hecho de que los compuestos adyuvantes a base de aluminio están presentes en las vacunas que podrían inhibir el proceso de digestión enzimática.

Los datos adquiridos posteriormente permitieron proporcionar aclaraciones sustantivas, especialmente con respecto a la disputa encontrada en el punto c.

2. Nuevas ideas y análisis

2.1 Información adicional sobre el análisis del producto Infanrix Hexa

Antes de continuar con la ilustración de los nuevos datos adquiridos sobre las vacunas Hexyon y Gardasil 9, es imprescindible responder a la pregunta inherente a la duda planteada con respecto a la inhibición de la actividad proteolítica de la tripsina causada por la presencia de adyuvantes a base de aluminio. en la vacuna Infanrix Hexa. A este respecto, debe especificarse que siempre hay un control de la digestión dentro del digestato tríptico. De hecho, la tripsina utilizada para llevar a cabo la digestión, aunque diseñada para prevenir la autólisis, tiene un pequeño porcentaje de esta última que, en caso de actividad enzimática, conduce a la obtención del fragmento que tiene m / z 842 y la siguiente secuencia de péptidos : VATVSLPR. Este fragmento se detectó realmente dentro del digestato tríptico del producto Infanrix Hexa como verificable por el cromatograma de extracción de iones (Figura 1).

Figura 1: Cromatograma de extracción de iones asociado con el ión a una relación m / z 842 detectado en la muestra relacionada con el lote del producto Infanrix Hexa (número de lote A21CD072D).

Además, se realiza una verificación externa mediante la digestión de la hemoglobina, para verificar aún más la bondad del lote de tripsina utilizado. La hemoglobina, analizada en la sección de análisis donde se controló el producto, fue reconocida con una puntuación estadística significativa (loge <-100). Estos datos permitieron confirmar el hecho de que la actividad enzimática estaba presente.

2.2 Nuevos análisis relacionados con productos Hexyon y Gardasil

El análisis de los productos Hexyon y Gardasil 9 condujo a la detección de perfiles moleculares complejos. En este caso, sin embargo, se detectó la presencia de la mayoría de los antígenos reportados en el prospecto. Se detectaron operando por digestión tríptica y en presencia de adyuvantes. Este hecho refuerza aún más la evidencia de que la reacción de digestión tríptica no se inhibe en presencia de adyuvantes.

En el caso de las vacunas Hexyon y Gardasil 9, la complejidad del perfil molecular se atribuyó principalmente a la presencia de numerosas especies, con bajo peso molecular, no identificables a través de las bases de datos de referencia de Metlin. ^{1 - 2} y KEGG ³.

3. Conclusiones y consideraciones finales.

Los análisis realizados llevaron a la siguiente conclusión:

1. El perfil molecular de las vacunas analizadas es generalmente complejo y en gran parte desconocido.
2. Existen contaminaciones proteicas, no declaradas en el prospecto, cuya composición es variable.
3. En varios casos no se detectaron los antígenos declarados en el prospecto. Este hecho podría atribuirse a varios factores. Entre estos últimos, podemos considerar la sensibilidad del método utilizado. Sin embargo, creemos que podemos excluir el fenómeno de inhibición de la digestión debido a la presencia de adyuvantes en la formulación de la vacuna. De hecho, la actividad enzimática se confirma principalmente por la presencia de fragmentos de autólisis trípticos, dentro de las soluciones de las vacunas digeridas (control interno).

4. Estudios futuros

Se realizarán más estudios como parte de las actividades de investigación y desarrollo destinadas a investigar los siguientes aspectos:

1. composición macromolecular asociada con residuos sólidos presentes en vacunas (análisis MALDI TOF MS); ⁵
2. evaluación de la concentración de metales presentes en los productos.
3. Análisis de segundo nivel para confirmar la presencia de compuestos tóxicos detectados en la fase de selección. Por lo tanto, su concentración estará relacionada con su toxicidad según lo establecido en las hojas de datos de seguridad internacional. Los análisis de segundo nivel se llevarán a cabo de conformidad con la directiva europea UE 2002/657 / CE, útil para garantizar altos estándares de calidad en el sector de la espectrometría de masas. ⁶

en fe
d. ssa Loretta Bolgan

5. Referencias bibliográficas.

1. Autenhahn R, Cho K, Uritboonthai W, Zhu Z, Patti G, Siuzdak G (septiembre de 2012). "Un flujo de trabajo acelerado para la metabolómica no dirigida utilizando la base de datos METLIN". Biotecnología de la naturaleza. 30: 826–828. doi: 10.1038 / nbt.2348. PMC 3666346. PMID 22965049.
2. Smith CA, I'Maille G, Want EJ, Qin C, Trauger SA, Brandon TR, Custodio DE, Abagyan R, Siuzdak G (diciembre de 2005). "METLIN: una base de datos espectral de masas de metabolitos" (PDF). Ther Drug Monit. 27 (6): 747–51. doi: 10.1097 / 01.ftd.0000179845.53213.39. PMID 16404815.
3. Kanehisa M (2013). "Evolución química y genómica de las redes de reacción catalizadas por enzimas". FEBS Lett. 587 (17): 2731–7.
4. Cristoni S, Bernardi LR. "Análisis de datos de bioinformática en espectrometría de masas para estudios de proteómica". Expert Rev Proteomics. Diciembre de 2004; 1 (4): 469-83.
5. Cristoni S, Bernardi LR. "Desarrollo de nuevas metodologías para el estudio de espectrometría de masas de macromoléculas bioorgánicas". Mass Spectrom Rev.2003 noviembre-diciembre; 22 (6): 369-406.
6. Cristoni S, Dusi G, Brambilla P, Albini A, Conti M, Brambilla M, Bruno A, Di Gaudio F, Ferlin L, Tazzari V, Mengozzi S, Barera S, Sialer C, Trenti T, Cantu M, Rossi Bernardi L, Noonan DM. "SANIST: optimización de una tecnología para la identificación de compuestos basada en la directiva de la Unión Europea con aplicaciones en análisis forenses, farmacéuticos y alimentarios". J. Mass Spectrom. 2017 enero; 52 (1): 16-21. doi: 10.1002 / jms.3895.

Descargar: CORVELVA-Informe-técnica-Finale.pdf