Vaccinegate: secuenciación completa del genoma de MRC-5 contenida en Priorix Tetra

Vaccinegate: secuenciación completa del genoma de MRC-5 contenida en Priorix Tetra

Estos últimos análisis fueron posibles gracias a la contribución activa de las asociaciones francesas. Asociación Liberté Informaciones Santé (ALIS) Ligue nationale pour la liberté des vacunaciones (LNPLV) y la asociación australiana Red Australiana de Riesgos de Vacunación (AVN) que agradecemos


Los secuenciadores de nueva generación se han convertido en instrumentos de elección para análisis en profundidad en el campo de la biología y la medicina, especialmente el de precisión. Estas herramientas permiten un enfoque nuevo y más global para una serie de aplicaciones, tales como secuenciación de novo, estudios de metagenómica, epigenómica, secuenciación de transcriptomas y secuenciación de genomas.

La última aplicación (re-secuenciación) está muy extendida en el campo humano tanto para fines de investigación como de diagnóstico y consiste en la secuenciación con tecnología NGS (secuenciación de próxima generación) de un genoma individual completo para mapear mutaciones de un solo nucleótido (SNP). pronunciación 'snip'), las inserciones y deleciones de secuencias más o menos largas ocurrieron en ciertas posiciones del genoma y variaciones en el número de copias de porciones de genoma / genes (CNV, Variantes de número de copia). 

Este procedimiento es útil para comprender los mecanismos de desarrollo de algunas patologías con el fin de identificar las direcciones para el tratamiento clínico futuro, como en el caso del cáncer. De hecho, con este método, el patrimonio genético de un paciente con cáncer se puede decodificar completamente en tejido normal y tumoral, lo que permite comprender qué ha cambiado en el genoma y, si es posible, intervenir con protocolos específicos.

El procedimiento de re-secuenciación requiere que el ADN de un individuo se rompa mecánicamente en pequeños fragmentos (400-500 pares de bases) y que los fragmentos estén unidos a tractos de ADN artificiales llamados adaptadores, que permiten unir los fragmentos de ADN humano a una superficie de vidrio sobre la cual se leen las bases (A, C, G, T). Las bases de ADN se leen incorporando reacciones químicas de nucleótidos marcados con moléculas fluorescentes. Los millones de secuencias (lecturas) obtenidas de la secuenciación en la superficie del vidrio, luego se mapean en el genoma de referencia humano con el software apropiado y, por lo tanto, se identifican todas las variantes presentes en el genoma analizado, con respecto a la referencia. 

Este mismo procedimiento se realizó en el genoma humano presente en el lote Priorix Tetra. n. A71CB256A, genoma perteneciente a la línea celular MRC-5 (de origen fetal); El trabajo se llevó a cabo en una empresa ubicada en los EE. UU., que habitualmente se ocupa del análisis de los genomas humanos mediante la secuenciación. *

* El nombre del laboratorio que realizó este análisis se incluirá en la próxima declaración que depositaremos en la Fiscalía de Roma, así como en los organismos de control italianos y europeos. Las realidades que están depositando los resultados de los análisis financiados por Corvelva también se actualizarán inmediatamente con estos resultados desconcertantes. No negamos que, como padres en primer lugar, nos angustien los resultados que informamos a continuación, si lo que hemos descubierto hasta ahora no fue suficiente.


Resultados

Se descubrió que el genoma de referencia humano estaba cubierto por lecturas que se originaban en el ADN de la vacuna en un 99.76%, por lo tanto, en casi toda su totalidad. Por lo tanto, el ADN humano fetal representado en esta vacuna es un genoma individual completo o está presente en la vacuna de ADN genómico de todos los cromosomas de un individuo masculino (y, de hecho, el feto del que deriva la línea celular MRC-5 es masculino).

A continuación se presentan los resultados del análisis de los diversos tipos de variantes con respecto al genoma de referencia humano.


Variantes de un solo nucleótido (SNP) e inserciones / deleciones cortas (InDels)

Las variantes de bases de ADN únicas (SNP, pronunciadas 'snip') son polimorfismos, es decir, variaciones del material genético, transmitidas por un solo nucleótido. Los 'InDels', por otro lado, son pequeñas inserciones y deleciones de menos de 50 pb de longitud y constituyen otra clase de variantes genómicas en el genoma humano.

Se han identificado un total de aproximadamente 3.6 millones de SNP en el genoma de la vacuna humana (de los cuales el 98.31% ya se informó en la base de datos pública dbSNP y 61.805 nuevos u originales de este ADN) y aproximadamente 804 mil InDels (de los cuales 89.42% ya reportado en dbSNP y 85.106 nuevos). 

La cantidad de SNP está en línea con lo que se informa en la literatura en un "genoma humano típico", mientras que los indeles están en una cantidad mayor que la que informa el "Consorcio del Proyecto 1000 Genomas" o 800 mil en comparación con 600 mil.

CNV (Variantes de número de copia) y SV (Variantes estructurales)

Las variantes del número de copias (CNV) son variantes genómicas debido a variaciones en el número de copias de fragmentos relativamente grandes (más de 50 pb) entre genomas individuales. Hay dos tipos de CNV: tipo "ganancia" (ganancia de copias) y tipo "pérdida" (pérdida de copias). Se han detectado 218 CNV en el genoma de la vacuna humana, 82 de los cuales son del tipo "ganancia" (que cubre una porción del genoma igual a aproximadamente 6.9 millones de pares de bases) y 136 CNV de "pérdida" (que cubre una parte del genoma alrededor de 70 millones de bases).

Según lo descrito por The 1000 Genomes Project Consortium en "Una referencia global para la variación genética humana (Nature, vol. 526, 10 de octubre de 2015)", un genoma humano típico contiene entre 2.100 y 2.500 variantes grandes, que incluyen:

  • 1.000 eliminaciones grandes
  • 160 variaciones en el número de copias (CNV)
  • 10 reversiones

que influyen en general, considerando también las inserciones, en 20 millones de bases de secuencia.

Como se observó para los INDEL cortos, incluso en el caso de inserciones y deleciones grandes, el genoma de la vacuna no está en línea con un genoma humano "normal", siendo mucho más "reordenado" que un genoma de un individuo común.


Visualización circular del genoma (circo plot)

A continuación, se muestra una representación gráfica del genoma de la vacuna llamada "trama de circos" (que se usa comúnmente para representar un genoma re-secuenciado), junto con otro que representa un genoma re-secuenciado a partir del ADN extraído de la sangre. de un individuo sano - genoma "normal":

corvelva mrc5 1


Significado de los diversos círculos concéntricos.

corvelva mrc5 2

7) El anillo más central representa la inferencia de SV (variantes estructurales) en las regiones exónicas y de empalme. ENTRE (naranja, translocaciones), INS (verde, inserciones), DEL (eliminaciones, gris), DUP (duplicaciones, rosa) e INV (inversiones, azul).

6) El sexto anillo representa la inferencia de CNV (Variantes en número de copias). Rojo significa ganar fragmentos de ADN y verde significa pérdida.

5) El quinto anillo representa la proporción de SNP en homocigosidad (naranja) y en heterocigosidad (gris) en el estilo de histograma.

4) El cuarto anillo (verde) representa la densidad snp en un estilo de "gráfico de dispersión".

3) El tercer anillo (negro) representa la densidad de los INDEL en un estilo de "gráfico de dispersión".

2) El segundo anillo (azul) representa la cobertura de las lecturas de estilo histograma.

1) El círculo externo (el primer círculo) es el número de cromosoma.     

También se puede hacer una comparación aproximada entre el ADN fetal y el ADN de células HeLa, la línea celular inmortalizada también utilizada en la producción de la vacuna contra la polio.

corvelva mrc5 3

Se debe enfatizar que las translocaciones de las células HeLa representadas en el diagrama de los circos por las líneas del núcleo se refieren a todo el genoma (por lo tanto, parte codificante y no codificante), mientras que en el caso de las células de vacuna fetal se refieren solo a los genes codificadores.

No es necesario ser científico para entender desde los circos, simplemente de un vistazo, que el genoma de la vacuna no es un genoma que pueda definirse como "normal". Las líneas naranjas entrelazadas en el centro de los circos, no tan numerosas en el anillo correspondiente del genoma "normal", ya nos hacen comprender la anomalía de este genoma.


Conclusiones 

El ADN genómico humano contenido en la vacuna del lote Prorix. n. A71CB256A es evidentemente anómalo, presentando inconsistencias importantes con respecto a un genoma humano típico, es decir, el de un individuo sano. Existen numerosas variantes desconocidas (no señaladas en bases de datos públicas) y varias de ellas se encuentran en genes implicados en el cáncer. Lo que también es evidentemente anómalo es el exceso de genoma que muestra cambios en el número de copias (CNV) y variantes estructurales (SV), como translocaciones, inserciones, deleciones, duplicaciones e inversiones, muchas de las cuales involucran genes.

Se desconoce la contribución potencial de las muchas variantes (no presentes en la literatura científica y en las bases de datos públicas) al fenotipo de las células utilizadas para el crecimiento de los virus de la vacuna.


Dentro del PDF encontrará todas las ideas relacionadas también con las implicaciones para la salud y la correspondencia con la EMA.


 Descargar: CORVELVA-Ri-de secuenciación del genoma humano-Priorix-Tetra.pdf