Virus adventicios y rubéola en el lote Priorix Tetra A71CB256A

Durante la fase de selección para la evaluación de contaminaciones e impurezas de la vacuna Priorix Tetra, surgieron varios problemas críticos: el primero se refería a la no detección del virus de la rubéola con el nivel de secuencia utilizado; Dado que este resultado planteaba la duda de que se trataba de un error en el procedimiento utilizado, el nivel de secuenciación aumentó considerablemente hasta alcanzar una profundidad muy alta (se produjeron 260 millones de secuencias). De esta forma, el virus de la rubéola se detectó en 114 copias, equivalentes al 0.00004% del total de las secuencias y mediante una lectura manual de las secuencias fue posible eliminar cualquier fuente de error del software utilizado y confirmar definitivamente la presencia de rubéola en el muestra.

Sin embargo, este procedimiento también permitió la identificación de virus adventicios presentes en el bajo número de copias, y lo que se ha visto es que el número de copias de los virus adventicios excedió el del número de copias de rubéola. Luego, otras dos preguntas muy importantes surgieron para ser resueltas:

1. ¿La rubéola está presente en la vacuna en cantidad suficiente para producir un efecto inmunogénico o puede considerarse por debajo del umbral (es decir, como una contaminación accidental)?
2. ¿Están realmente presentes los virus adventicios? Si es así, ¿pueden ser peligrosos?

Sobre el punto 1) Podemos cuestionar la capacidad del virus de la rubéola atenuada para actuar como un antígeno inmunogénico debido al número insignificante de copias y la atenuación que debilita aún más su eficacia, por lo tanto, podemos considerar en todos los aspectos un contaminante por debajo del umbral

Sobre el punto 2) La lista de virus adventicios detectados mediante la detección mediante la comparación con las secuencias depositadas en las bases de datos oficiales contenía un número considerable de virus cuya identificación podría haber sido erróneamente atribuida por el software que los clasificó, precisamente debido al grado de incertidumbre vinculada a la muy baja Número de copias. Para confirmar su presencia, fue necesario verificarlos uno por uno manualmente utilizando un software diferente (BLAST) y, por lo tanto, fue posible confirmar la presencia de los siguientes retrovirus contaminantes:

Se sabe que estos virus son contaminantes adventicios de las vacunas y se conoce su peligro potencial, por lo que los fabricantes deben verificar su ausencia completa en la vacuna.

Se deduce que de este análisis en profundidad en esta vacuna se confirman dos no conformidades sobre eficacia y seguridad:

• La presencia en muy baja cantidad de copias (sub-umbral) de rubéola
• La presencia de virus adventicios potencialmente peligrosos.

En cuanto a la confirmación de las trazas de otros genomas encontrados en los datos de RNA-seq, como 'virus bacterianos y ambientales no clasificados' que incluye secuencias de fagos, 'virus dsRNA' y 'virus RNA no clasificados ShiM-2016' que incluye genomas virales poco conocidos, es Se requiere un análisis manual en profundidad adicional para demostrar la asignación correcta y la presencia efectiva. La presencia del virus de la hepatitis B NO fue confirmada por análisis BLAST.

A continuación hay una tabla que resume lo que se describe en el texto:

* Confirmado manualmente con el software BLAST

Descargar: CORVELVA-Insights-presencia-rubeola-y-virus-adventicia-Priorix-Tetra.pdf