Rapport sur les résultats obtenus à ce jour (mars 2019)

Rapport sur les résultats obtenus à ce jour (mars 2019)

Nous voulons faire le point avec vous sur la situation. Huit mois se sont écoulés depuis juillet 2018 et dans ce laps de temps, nous avons obtenu des résultats extrêmement satisfaisants. Nous avons présenté un programme de recherche et en ce qui concerne l'analyse des vaccins, nous sommes en mesure de faire un point de référence, avec les objectifs atteints, ceux en cours de finalisation et ceux uniquement prévus pour l'instant.

Pour commencer, les analyses de 2 composés pour chaque vaccin ont été vérifiées au moyen d'étalons, en utilisant des étalons de contrôle certifiés avec une concentration de l'ordre de microgrammes / mL. Les composés que nous avons choisis sont parmi ceux connus pour leur profil de risque critique. Nous parlons d'une quantité cumulée, une quantité totale de celles reconnues comme identités et de celles à identifier, qui peut être estimée dans l'ordre de 50 microgrammes / mL, contrairement aux directives EMA / FDA.

Ces tests ont donné des résultats positifs, ils confirment donc pleinement la méthode d'analyse! Les contaminations observées sont probablement dues à des phénomènes et sujets de processus de fabrication différents et variables. Ce qui a été observé au cours des études est une variation "inter-lots" de la composition, ce qui nous fait supposer que certaines étapes du processus de fabrication du produit sont difficiles à contrôler.


Ces analyses nous ont permis de réaliser les étapes suivantes:

  • Évaluation de la conformité de la composition comme indiqué dans la fiche technique du vaccin
  • Dépistage des contaminations chimiques et protéiques / peptidiques, ainsi que celles dérivant du matériel génétique
  • Étude de confirmation des composés cibles chimiques et protéiques grâce à des certificats d'inspection standard

Les vaccins suivants ont été soumis à un premier dépistage:

  • Infanrix Hexa - GlaxoSmithKline Biologicals sa
  • Priorix Tetra - GlaxoSmithKline SpA
  • Hexyon - Sanofi Pasteur Europe
  • Gardasil 9 - Vaccins MSD

Ces autres vaccins ont été analysés comme dépistage initial:

  • Vaccin antirougeoleux vivant BP - Groupe Poonawalla (Profarma AG, Baar)
  • MMR vax Pro - Vaccins MSD, France
  • PolioInfanrix - GlaxoSmithKline, Belgique
  • Fluad - Seqirus Srl, Sienne
  • Vivotif - PaxVax, Royaume-Uni

Technologies utilisées

L'étude est structurée en:

Analyse d'impuretés et de contamination chimique et protéique

  • Le système d'analyse LC-SACI / ESI-MS associé à la plateforme pionnière SANIST a été utilisé pour effectuer un premier dépistage d'identification sur les vaccins d'intérêt, ainsi que pour le confirmer avec les normes de contrôle, avec un niveau minimum entre les nanogrammes et microgrammes / dose
  • La technologie MALDI-TOF-MS a été utilisée pour étudier les macromolécules insolubles présentes dans les vaccins

Analyse du matériel génétique

  • Test de présence d'acides nucléiques (ADN / ARN) d'origine humaine et animale et de micro-organismes (virus, bactéries) à l'aide de la méthode de séquençage de nouvelle génération, qui a permis de quantifier la séquence de matériel génétique contenue dans les vaccins de manière très spécifique et manière précise
  • Vérification de la correspondance des bactéries et des séquences génomiques des virus vaccins vivants atténués et inactivés (présence de variantes génétiques)

Analyse quantitative des métaux

  • La technologie ICP-MS a permis de quantifier les métaux présents dans les vaccins avec une limite minimale de 5ng / dose.

Analyse de la contamination chimique et protéique

Après un premier criblage qui avait identifié la présence de centaines de signaux chimiques à l'intérieur des vaccins, des tests de confirmation ont été effectués au moyen d'étalons de 2 composés par vaccin, en utilisant des étalons de contrôle certifiés, choisis parmi ceux connus pour leur profil de danger critique et pour quantité non résiduelle (à considérer comme des composants des vaccins, à inclure donc dans la fiche technique et à quantifier).

Ces tests ont donné des résultats positifs, ils confirment donc pleinement la méthode d'analyse. Jusqu'à présent, seuls deux composés ont été testés uniquement pour des raisons économiques, en fait cette étude n'est pas terminée car elle est limitée par le coût considérable de l'enquête mais nous avons choisi d'identifier les normes les plus pertinentes quant aux restrictions réglementaires et considérer que ce type d’enquête approfondie ne devrait pas nous appartenir après tout.

Les contaminations observées sont très probablement dues à des phénomènes et sujets de processus de fabrication différents et variables. Ce que nous avons observé au cours des étapes de la recherche est une variation inter-lots de la composition, ce qui nous fait supposer que certaines étapes de l'ensemble du processus de fabrication du produit sont difficiles à contrôler.Compte tenu des facteurs analytiques habituels, on peut supposer que le la concentration est de l'ordre de microgrammes / ml. Quant à la quantité cumulée, il est possible d'estimer sur la base d'une évaluation semi-quantitative (puisque la plupart des composés sont inconnus) que les contaminants sont de l'ordre de 50μg / mL. Il s'agit d'une donnée importante car les directives EMA / FDA sont très claires à ce sujet. Les contaminations ne doivent pas être présentes (en dessous du niveau de détection) ou si elles sont présentes, elles doivent être bien identifiées et les méthodes appropriées pour les réduire doivent être prouvées comme étant appliquées. Dans ce cas, les contaminants ne sont pas inférieurs au niveau de capacité du dispositif de détection (ng / ml), nous pensons donc que le producteur n'applique aucune méthode de purification. Quant à la présence de virus adventices, le problème n'existe pas, car ils ne doivent pas du tout être présents.

  • EN COURS - Des analyses de confirmation interlaboratoires de ces composés sont en cours.
    Les composés identifiés par la norme seront reconfirmés avec la même technologie par différents laboratoires. L'un de nos objectifs est de coordonner également ce projet avec le soutien et la coopération d'associations internationales.

  • EN COURS - Etude de la cinétique de précipitation des antigènes liés à l'aluminium.

Analyse métagénomique

  • EN COURS - Analyse avec des normes supplémentaires de contrôle de l'ADN et de l'ARN d'un autre lot de vaccins.
    Dès le début de ce projet, il était clair pour nous que les analyses, pour répondre aux exigences nécessaires de réplicabilité et de précision des données, devaient être réalisées avec l'instrumentation la plus avancée, et en surveillant les diversités au sein d'un même lot et entre différents lots. Alors que nous procédons aux investigations, d'autres lots sont continuellement analysés, avec évidemment le budget et la disponibilité des produits.

  • EN COURS - Analyse de séquence du génome d'ADN fœtal de la lignée cellulaire MRC-5.
    Depuis le premier dépistage, nous avons eu la possibilité de vérifier par la norme que les lignées diploïdes utilisées étaient MRC-5, comme indiqué dans la fiche technique. Nous souhaitons approfondir l'étude de cette lignée cellulaire également du fait que sa présence est remarquable en quantité et en dimensions.

  • EN COURS - Étude de variantes mineures (quasi-espèces) des virus de la rougeole, des oreillons et de la rubéole.
    Par rapport au premier rapport de juillet 2018 (https://bit.ly/2UCC2iS), nous avons commandé une étude approfondie des variantes mineures, car les mutations des virus vaccinaux atténués n'étaient pas les seules trouvées. Cette question soulève également des doutes majeurs quant à l'efficacité et à l'innocuité du vaccin. Ce résultat prendra plus de temps que les autres rapports car la vérification des séquences des mutants doit être effectuée manuellement.

  • EN COURS - Analyse de confirmation interlaboratoires
    Nous avons identifié des laboratoires étrangers et nationaux auxquels nous avons commandé la réplication d'analyse par standard. Ce résultat sera bientôt disponible.

Projets en cours d'évaluation

Etude de la puissance des antigènes vaccinaux: cette étude doit être menée dans un centre accrédité par les agences de régulation pour l'étude préclinique des vaccins. L'objectif est de vérifier si les antigènes vaccinaux sont capables de produire ou de se lier à des anticorps spécifiques (on suppose théoriquement que ces anticorps sont protecteurs, mais cette analyse ne permet pas de prouver que le vaccin est capable de protéger contre la maladie). Le coût de cette étape pourrait être pertinent, donc le projet n'est actuellement qu'une hypothèse.


Télécharger: CORVELVA-Report-on-the-résultats-obtained.pdf


Traduit par l'équipe CLiVa - www.clivatoscana.com