Descrevemos alguns pontos que nos preocupam, prevemos que, quando iniciamos essas análises, da metagenômica à química atual, tínhamos muitas perguntas e estávamos apenas procurando respostas ... com os primeiros resultados, temos ainda mais perguntas e, acima de tudo, preocupações!

A investigação qualitativa-quantitativa de compostos orgânicos é de grande importância no campo farmacológico. Existem possíveis problemas de segurança decorrentes de novos processos de produção e das complexas características estruturais e biológicas dos produtos.

Daqui resulta que foram encontrados os seguintes na vacina:

• Contaminações químicas do processo de fabricação ou contaminação cruzada com outras linhas de produção
• Toxinas químicas
• Toxinas peptídicas bacterianas
• Macromolécula insolúvel e indigesta que reage ao teste de proteínas, mas não é reconhecida pelos bancos de dados de proteínas

A presença de:

• Antígenos proteicos de toxóides da difteria, tétano, coqueluche, hepatite B, Haemophylus influenzae B, Poliomielite 1-2-3
• Formaldeído e glutaraldeído, fenoxietanol, resíduos de antibióticos indicados na composição

Existem seis antígenos presentes na vacina Infanrix Hexa: os tóxicos do tétano, difteria e coqueluche, os antígenos D dos três vírus da poliomielite, as proteínas obtidas pela engenharia genética da hepatite B e os polissacarídeos do hemófilo quimicamente ligados ao toxóide do tétano. como transportadora. Para formar toxóides, é necessário um tratamento com formaldeído e glutaraldeído, o que deve permitir eliminar a toxicidade, mantendo a capacidade de estimular anticorpos protetores contra as toxinas originais.

O que esperávamos encontrar eram os três toxóides e os outros antígenos que não foram modificados pelos tratamentos com formaldeído e glutaraldeído, separáveis ​​um do outro e digeríveis pela enzima específica das proteínas (tripsina). Em vez disso, foi encontrado um polímero real, insolúvel e indigesto, consistindo no conjunto de antígenos quimicamente ligados (a serem definidos se presentes como um agregado dos antígenos individuais ou uma única macromolécula), sobre a qual também é encontrada informação na literatura para antígenos individuais. ^1-2
Essa macromolécula não foi reconhecida de forma alguma pelos bancos de dados de proteínas e, portanto, acaba sendo um composto sólido de estrutura química desconhecida.

A solubilidade das proteínas e a possibilidade de digeri-las (ou seja, cortá-las em pequenos fragmentos peptídicos) são as duas características típicas das proteínas, o que nos permite não estudá-las com os métodos de análise de proteínas. mas também são um requisito necessário para a interação com o sistema imunológico para a formação de anticorpos protetores, porque se a estrutura de uma proteína é profundamente modificada em relação à original, mesmo os anticorpos que se formam são completamente diferentes daqueles que são capazes de atacar os antígenos originais que causam doenças.

Como esse polímero que encontramos, derivado da mistura de antígenos, não é apenas diferente do ponto de vista da conformação espacial, mas, acima de tudo, é diferente do ponto de vista químico, podemos dizer que não estamos na presença de antígenos semelhantes aos originais, mas a um composto com toxicidade e eficácia desconhecidas e imprevisíveis.

Além do fato de que os antígenos da vacina não foram realmente detectados, foram encontrados 65 sinais de contaminantes químicos, dos quais 35% são conhecidos, ou seja, reconhecidos por comparação com os bancos de dados; entre eles, encontramos vários resíduos de processamento e contaminação cruzada de outras linhas de produção, cuja identificação será verificada na análise analítica de segundo nível (isto é, com padrões de controle).

Entre esses sinais, 7 toxinas químicas também foram identificadas, provavelmente originário do processo de processamento de antígenos ou de outros processos de produção presentes no local de produção da vacina; essas toxinas ainda não claramente definidas na estrutura parecem derivar em parte da reação de formaldeído, glutaraldeído e brometo de cianogênio com outros contaminantes químicos presentes na vacina. É enfatizado que a maioria dessas toxinas possui uma toxicidade estabelecida e publicada em Pubchem ³ ou Toxnet ⁴ e representam um problema de segurança significativo.

Vários peptídeos livres (isto é, fragmentos curtos de cadeias de aminoácidos) de origem bacteriana resultaram do estudo da fração de proteína e peptídeo, que, portanto, provém de células de cultura bacteriana para a extração de antígenos. Peptídeos bacterianos são relatados na literatura como alérgenos em potencial ⁵ e capaz de induzir reações auto-imunes ⁶ e estes também representam um questão de segurança que precisará ser esclarecida com as agências reguladoras.

Voltando aos dois pilares principais que nos fizeram iniciar esse caminho de análise e reiterando o conceito expresso por entrevista recente na prestigiosa revista científica Nature: estamos investigando a eficácia e a segurança das vacinas e, na realidade, é difícil entender como é possível dizer que essa vacina é capaz de formar anticorpos protetores contra as seis doenças para as quais nos protegemos e é ainda mais difícil entender como é possível estabelecer que esse cluster não seja tóxico em bebês, pois trata-se de seis antígenos neurotóxicos ligados entre si.

O hexavalente Infanrix hexa, pelo método que encomendamos, deixa enormes dúvidas tanto em sua eficácia quanto em sua segurança ...

Garantimos uma coisa: não vamos parar.

 Download: CORVELVA-Report-análise-composição-química-Infanrix-Hexa.pdf

Referências

1. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2017 de junho de 1; 1054: 80-92 - O uso combinado de ferramentas analíticas para explorar as estruturas da toxina tetânica e toxóide tetânico.
2. Vacina. 2007 de março de 8; 25 (12): 2213-27. - Investigação do mecanismo de desintoxicação da toxina do tétano tratada com formaldeído.
3. https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/search/
4. https://toxnet.nlm.nih.gov/
5. Int J Med Microbiol. Ago 2018; 308 (6): 738-750. - A busca por alérgenos bacterianos.
6. Microbiol dianteiro. 2017 de outubro de 9; 8: 1938 - Sequências mórbidas sugerem imitação molecular entre peptídeos microbianos e auto-antígenos: uma possibilidade de incitar a autoimunidade.

Insights

A vacina Infanrix Hexa tem a seguinte composição, copiamos fielmente da presente folha de dados técnicos folha de dados do fabricante:

A preparação do antígeno mostrada abaixo é a indicada no relatório EMA para a autorização de comercialização do Infanrix Hexa. ¹

Toxóide da difteria: O toxóide da difteria é obtido inativando a toxina (produzida por Corynebacterium diphtheriae) com formaldeído a 37 ° C em um ambiente levemente alcalino e depois é adsorvida em sais de alumínio (hidróxido e fosfato)

Toxóide tetânico: O toxóide tetânico é obtido com o mesmo procedimento que o toxóide difteria (Clostridium tetani é uma bactéria esporogênica anaeróbica obrigatória e produz tetanospasmina, uma toxina neurotrópica que atua bloqueando as sinapses que inibem a contração muscular reflexa)

Toxóide pertussic: os componentes da vacina acelular pertussis são obtidos por extração e purificação de culturas de fase I de Bordetella pertossis (um cocobacilo aeróbio, capaz de produzir quatro toxinas: toxina pertussis, toxina adenilato-ciclase, toxina dermonecrótica, citotoxina traqueal e dois tipos de lipopolissacarídeo; para a preparação da vacina acelular, apenas a toxina pertussis é purificada e utilizada), seguida de desintoxicação irreversível da toxina pertussis através do tratamento com glutaraldeído e formaldeído e tratamento com formaldeído dos componentes filamentosos da hemaglutinina e pertactina; os vários componentes são então adsorvidos em sais de alumínio.

Antígeno de superfície da hepatite B: é produzido a partir de culturas de Saccharomyces cerevisiae geneticamente modificadas que codificam o gene principal do antígeno de superfície do vírus da hepatite B; este antígeno é purificado através de várias etapas físico-químicas e se reúne espontaneamente em partículas esféricas de cerca de 20 nm de diâmetro, contendo o antígeno polipeptídico e uma matriz fosfolipídica. Este antígeno é então adsorvido em fosfato de alumínio.

Vírus da poliomielite (inativado): A vacina Salk, ou poliomielite inativada (IPV), é baseada em três cepas de referência virulentas e selvagens: Mahoney (poliovírus tipo 1), MEF-1 (poliovírus tipo 2) e Saukett (poliovírus tipo 3), cultivadas em Linha celular VERO: trata-se de uma linha celular imortalizada obtida em 1962 a partir de rins de macacos africanos adultos (vervets); para a produção da vacina as células são submetidas a 130-140 passagens de propagação, (baixo nível de propagação), deve-se ter em mente que em mais de 200 passagens a linha celular se torna cancerígena em camundongos; o meio de cultura para o crescimento da linha VERO é de origem animal (portanto deve ser testado quanto à presença de vírus e príons contaminantes), enquanto o Meio 199 é utilizado para o crescimento do vírus, que não contém substâncias de origem animal. Após serem isolados e purificados, os vírus vivos são inativados com formaldeído.
Pelo que é conhecido pela EMA, a vacina não contém os vírus em si, mas as proteínas produzidas pelas três cepas, denominadas Antígeno D; essas proteínas são formadas antes do tratamento com formaldeído e glutaraldeído, que tem a função de inativar os toxóides e destruir todo o material genético proveniente das células Vero, potencialmente carcinogênico, mas também o vírus da poliomielite.

Polissacarídeo de Haemophilus influenzae tipo b: é preparado a partir da cepa bacteriana Hib 20,752 (existem cepas e cápsulas não capsuladas, não tipificáveis ​​e cápsulas, antigenicamente distintas em 6 tipos diferentes nomeados pelas letras do alfabeto de a a F. As infecções mais freqüentes e menos graves causadas por Hib são: aquelas que afetam o trato respiratório superior e geralmente são sustentadas por cápsulas que não são cápsulas.As infecções invasivas, como meningite, são causadas principalmente por cápsulas, especialmente o tipo b)
O polissacarídeo é obtido a partir do crescimento da cepa bacteriana em um meio de cultura sintético e após a ativação com brometo de cianogênio e derivatização com um espaçador hidrazida-adípico, é acoplado ao toxóide do tétano por condensação carbamídica; após purificação, o conjugado é adsorvido em sais de alumínio e depois liofilizado na presença de lactose como estabilizante. A conjugação com o toxóide tetânico é necessária para conferir antigenicidade ao polissacarídeo, pois altera o polissacarídeo de antígeno independente de T para antígeno dependente de T.

Produto acabado: os concentrados estéreis absorvidos no alumínio de DT, PT, FHA, PRN e HBsAg e o componente trivalente do IPV são misturados com uma solução estéril de cloreto de sódio e água para injeção e adicionados com uma solução estéril de 2-fenoxietanol.
O 2-fenoxietanol é um agente antimicrobiano e é adicionado ao produto final porque a esterilização final por filtração do componente DTPa-HBV-IPV não é possível e a opalescência da suspensão pode mascarar a contaminação microbiana.