Предисловие

Прежде всего мы хотели бы поблагодарить очень полезные комментарии, предоставленные теми, кто рассмотрел результаты анализов, проведенных в контексте научно-исследовательской деятельности, связанной с продуктами Priorix tetra и Infanrix Hexa. Представленные критические вопросы действительно были очень полезны для добавления научно-технических интеграций, способных прояснить проделанную работу. Мы считаем, что только благодаря здоровому общению научных взглядов можно сделать выводы о полученных данных, которые могут быть полезны для всего научного сообщества и для людей, которые к ним обращаются.

1. Состояние техники

Предварительные исследования (скрининг, не подлежащий подтверждению) биомолекулярного, метаболического и протеомного профиля, выполненные на продуктах Priorix Tetra и Infanrix Hexa, позволили получить структуру композиции, обобщенную в следующих пунктах:

1. Наличие различных аналитических сигналов, которые нельзя связать с известными соединениями через исследования в базах данных Metlin 1-2 и KEGG3. Поэтому возникла картина, связанная со значительной сложностью в составе коммерческих продуктов.
2. Присутствие белков не заявлено в листовке в продукте Priorix Tetra. Последнее потенциально может быть связано с остатками производственного процесса
3. Не обнаружение антигенов, заявленных в продукте Infanrix Hexa. Техника анализа состояла из ферментативного расщепления трипсином, связанного с методами масс-спектрометрии. 4-5

Эти данные вызвали несколько комментариев, особенно в отношении пункта C - Обнаружение белка фактически осуществляется с использованием стандартного подхода, признанного на международном уровне в течение более 10 лет 4, расщепления ферментом трипсина 4. Полученные таким образом пептиды хроматографически разделяют и анализируют с помощью масс-спектрометрии 4-5. Основное наблюдение было присуще тому факту, что в вакцинах присутствуют адъюванты на основе алюминия, которые потенциально могут ингибировать ферментативный процесс пищеварения. Полученные впоследствии данные позволили дать существенные разъяснения, особенно в отношении жалобы, изложенной в пункте C.

2. Новые идеи и анализ

2.1 Выводы, связанные с анализом продукта Infanrix Hexa

Прежде чем приступить к иллюстрации новых полученных данных о вакцинах Hexyon и Gardas 9, важно ответить на вопрос, касающийся сомнений в отношении ингибирования протеолитической активности трипсина, вызванного присутствием адъювантов на основе алюминия в Infanrix Hexa. вакцины. В связи с этим необходимо указать, что в процессе триптического расщепления всегда присутствует контроль пищеварения. Фактически, трипсин, используемый для осуществления расщепления, хотя и разработан для предотвращения автолиза, имеет небольшой процент от последнего, что в случае ферментативной активности приводит к получению фрагмента, имеющего m / z 842, и следующей пептидной последовательности: VATVSLPR. Указанный фрагмент был фактически обнаружен при триптическом расщеплении продукта Infanrix Hexa, что подтверждается хроматограммой ионной экстракции (фиг. 1).

Рисунок 1. Ионно-связанная ионная экстракционная хроматограмма с отношением m / z 842, найденная в образце партии продукта Infanrix Hexa (партия № A21CD072D).

Кроме того, осуществляется внешний контроль путем переваривания гемоглобина, чтобы дополнительно проверить качество использованной партии трипсина. Гемоглобин, анализируемый в разделе анализа, в котором отслеживался продукт, был распознан со значительной статистической оценкой (loge <- 100). Эти данные подтвердили факт наличия активности фермента.

2.2 Новые анализы, касающиеся продуктов Hexyon и Gardasil

Анализ продуктов Hexyon и Gardas 9 позволил обнаружить сложные молекулярные профили. В этом случае, однако, было обнаружено присутствие большинства антигенов, указанных в информационной брошюре. Они были обнаружены при триптическом пищеварении и в присутствии адъювантов.

Этот факт еще более усиливает доказательства того, что реакция расщепления триптикой не ингибируется в присутствии адъювантов. В случае вакцин Hexyon и Gardas 9 сложность молекулярного профиля была в основном обусловлена ​​присутствием многочисленных видов с низким молекулярным весом, которые нельзя идентифицировать в справочных базах данных Metlin 1-2- и KEGG 3.

3. Выводы и заключительные соображения

Проведенные анализы позволили сделать следующие выводы:

1. Молекулярный профиль анализируемых вакцин, как правило, сложен и в значительной степени неизвестен.
2. Существуют белковые загрязнения, не указанные в листовке, состав которых варьируется.
3. В нескольких случаях заявленные в листовке антигены не были обнаружены. Этот факт можно объяснить несколькими факторами. Среди последних можно рассмотреть чувствительность используемого метода. Однако мы считаем, что можем исключить явление торможения пищеварения из-за присутствия адъювантов в составе вакцины. Фактически, ферментативная активность в основном подтверждается наличием фрагментов триптического автолиза в растворах расщепленных вакцин (внутренний контроль).

4. Будущие исследования

Дальнейшие исследования будут проводиться в рамках исследований и разработок, направленных на изучение следующих аспектов:

1. макромолекулярная композиция, связанная с твердыми остатками, присутствующими в вакцинах (анализ MALDI TOF MS); 5
2. оценка концентрации металлов, присутствующих в продуктах.
3. Второй уровень анализа для подтверждения наличия токсических соединений, обнаруженных на этапе скрининга. Их концентрация будет зависеть от их токсичности в соответствии с тем, что указано в международных паспортах безопасности. Анализ второго уровня будет проводиться в соответствии с европейской директивой ЕС 2002/657 / EC, что полезно для обеспечения высоких стандартов качества в секторе масс-спектрометрии. 6

Лоретта Болган

5. Библиографические ссылки

1. Аутенхан Р, Чо К, Уритбоунтай В, Чжу З, Патти Дж, Сиуздак Г (сентябрь 2012). «Ускоренный рабочий процесс для нецелевой метаболомики с использованием базы данных METLIN». Природная биотехнология. 30: 826–828. DOI: 10.1038 / nbt.2348. PMC 3666346. PMID 22965049.
2. Смит CA, I'Maille G, Want EJ, Цинь C, Trauger SA, Брэндон TR, Custodio DE, Абагьян R, Siuzdak G (декабрь 2005). "МЕТЛИН: база данных масс-спектра метаболитов" (PDF). Ther Drug Monit. 27 (6): 747–51. DOI: 10.1097 / 01.ftd.0000179845.53213.39. PMID 16404815.
3. Канехиса М (2013). «Химическая и геномная эволюция ферментативно-катализируемых реакционных сетей». FEBS Lett. 587 (17): 2731–7.
4. Кристони С, Бернарди Л.Р. «Биоинформатика в масс-спектрометрическом анализе данных для протеомных исследований». Эксперт Рев Протеомика. 2004 Dec; 1 (4): 469-83.
5. Кристони С., Бернарди Л. Р.. «Разработка новых методик масс-спектрометрического исследования биоорганических макромолекул». Mass Spectrom Rev.2003 ноябрь-декабрь; 22 (6): 369-406.
6. Кристони С, Дуси Дж, Брамбилла П, Альбини А, Конти М, Брамбилла М, Бруно А, Ди Гаудио Ф, Ферлин Л, Таццари В, Менгоцци С, Барера С, Сиалер С, Тренти Т, Канту М, Росси Бернарди Л, Нунан Д.М. «SANIST: оптимизация технологии идентификации соединений на основе директивы Европейского Союза с применением в криминалистической, фармацевтической и пищевой анализах». J. Mass Spectrom. 2017 январь; 52 (1): 16-21. doi: 10.1002 / jms.3895.

Скачать: CORVELVA-Final-техническо-Report.pdf

Перевод команды CLiVa - www.clivatoscana.com