Мы хотим подвести итоги ситуации вместе с вами. С июля 2018 года прошло восемь месяцев, и за этот период мы достигли чрезвычайно удовлетворительных результатов. Мы представили программу исследований и касаемо анализа вакцин, которые мы можем сделать ориентиром, с достигнутыми целями, поставленными задачами и только запланированными на данный момент.

Для начала анализы 2 соединений для каждой вакцины были проверены с помощью стандартов с использованием сертифицированных контрольных стандартов с концентрацией порядка микрограммов / мл. Выбранные нами соединения относятся к числу тех, которые известны своим критическим профилем опасности. Мы говорим о совокупном количестве, общем количестве лиц, признанных идентичными, и тех, которые необходимо идентифицировать, которые можно оценить в пределах порядка 50 микрограммов / мл, в отличие от руководящих принципов EMA / FDA.

Эти тесты дали положительные результаты, поэтому полностью подтверждают метод анализа! Наблюдаемые загрязнения, вероятно, связаны с различными явлениями и особенностями производственного процесса. В ходе исследований было обнаружено «межпартийное» изменение состава, что заставляет нас предположить, что на протяжении всего процесса производства продукта есть некоторые этапы, которые трудно контролировать.

Такой анализ позволил нам выполнить следующие шаги:

• Оценка соответствия состава, как указано в спецификации вакцины
• Скрининг на химические и белково-пептидные загрязнения, а также загрязнения генетическим материалом.
• Подтверждающее изучение химических и белковых целевых соединений с помощью стандартных сертификатов проверки

Следующие вакцины были подвергнуты первичному скринингу:

• Инфанрикс Гекса - GlaxoSmithKline Biologicals sa
• Приорикс Тетра - ГлаксоСмитКлайн Спа
  
• Гексион - Санофи Пастер Европа
• Гардасил 9 - MSD Vaccins

Эти другие вакцины были проанализированы в качестве первоначального скрининга:

• Вакцина против кори живого BP - Poonawalla Group (Profarma AG, Baar)
• MMR vax Pro - MSD Vaccins, Франция
• ПолиоИнфанрикс - ГлаксоСмитКляйн, Бельгия
• Fluad - Seqirus Srl, Сиена
• Vivotif - PaxVax, Великобритания

Используемые технологии

Исследование структурировано в:

Анализ примесей, химического и белкового загрязнения

• Система анализа LC-SACI / ESI-MS, связанная с новаторской платформой SANIST, использовалась для выполнения первоначального идентификационного скрининга интересующих вакцин, а также для подтверждения его контрольными стандартами с минимальным уровнем между нанограммами и микрограммы / доза
• Технология MALDI-TOF-MS была использована для изучения нерастворимых макромолекул, обнаруженных в вакцинах.

Анализ генетического материала

• Тест на наличие нуклеиновых кислот (ДНК / РНК) человеческого и животного происхождения и микроорганизмов (вирусов, бактерий) с использованием метода секвенирования следующего поколения, который позволил количественно определить последовательность генетического материала, содержащегося в вакцинах, в высокоспецифичной и точный способ
• Проверка соответствия геномных последовательностей бактерий и живых аттенуированных и инактивированных вакцинных вирусов (наличие генетических вариантов)

Количественный анализ металлов

• Технология ICP-MS позволила определить количество металлов, присутствующих в вакцинах, с минимальным пределом 5 нг / доза.

Анализ химического и белкового загрязнения

После первого скрининга, который выявил наличие сотен химических сигналов внутри вакцин, были проведены подтверждающие тесты с помощью стандартов по 2 соединения на вакцину с использованием сертифицированных контрольных стандартов, выбранных из тех, которые известны своим профилем критической опасности и не остаточное количество (такое, что считается компонентом вакцин, поэтому должно быть включено в технический паспорт и определено количественно).

Эти тесты дали положительные результаты, поэтому они полностью подтверждают метод анализа. Пока только два соединения были протестированы исключительно по экономическим причинам, на самом деле это исследование не является полным, поскольку оно ограничено значительными затратами на проведение обследования, но мы решили определить более подходящие стандарты в отношении нормативных ограничений, и это следует учитывать, что такого рода углубленное расследование в конечном итоге не должно зависеть от нас.

Наблюдаемые загрязнения, скорее всего, связаны с различными явлениями и особенностями производственного процесса. То, что мы наблюдали на этапах исследования, - это вариация состава между партиями, что заставляет нас предположить, что на протяжении всего производственного процесса продукта есть некоторые этапы, которые трудно контролировать. концентрация порядка микрограммов / мл. Что касается кумулятивного количества, на основе полуколичественной оценки (поскольку большинство соединений неизвестны) можно оценить, что загрязняющие вещества находятся в пределах порядка 50 мкг / мл. Это важные данные, потому что в рекомендациях EMA / FDA это очень четко сказано. Загрязнения не должны присутствовать (ниже уровня обнаружения), или, если они присутствуют, они должны быть хорошо идентифицированы и должны быть доказаны применимые соответствующие методы их уменьшения. В этом случае загрязняющие вещества не ниже уровня возможностей устройства обнаружения (нг / мл), поэтому мы считаем, что производитель не применяет никаких методов очистки. Что касается наличия случайных вирусов, то проблемы не существует, потому что их вообще не должно быть.

• В ПРОЦЕССЕ - Проводится межлабораторный подтверждающий анализ этих соединений.
  Соединения, идентифицированные стандартом, будут повторно подтверждены по той же технологии в разных лабораториях. Одна из наших целей - координировать этот проект также при поддержке и сотрудничестве международных ассоциаций.
  
  
• В ПРОЦЕССЕ - Изучение кинетики осаждения связанных с алюминием антигенов.

Метагеномный анализ

• В ПРОЦЕССЕ - Анализ с дополнительными стандартами контроля ДНК и РНК другой партии вакцин.
  С самого начала этого проекта нам было ясно, что анализы, чтобы соответствовать необходимым требованиям к тиражируемости и точности данных, должны проводиться с использованием самых передовых инструментов и путем мониторинга любых различий в одной и той же партии и между различными партии. Поскольку мы продолжаем расследование, другие партии постоянно анализируются, очевидно, с учетом бюджета и доступности продуктов.
  
  
• В ПРОЦЕССЕ - Анализ последовательности генома фетальной ДНК из линии клеток MRC-5.
  Поскольку с первого скрининга у нас была возможность стандартно проверить, что использовались диплоидные линии MRC-5, как указано в техническом паспорте. Мы хотели бы углубить изучение этой клеточной линии также в силу того факта, что ее присутствие заметно по количеству и размерам.
  
  
• В ПРОЦЕССЕ - Изучение минорных вариантов (квази-видов) вирусов кори, эпидемического паротита и краснухи.
  По сравнению с первым отчетом в июле 2018 года (https://bit.ly/2UCC2iS) мы заказали углубленное исследование минорных вариантов, поскольку мутации в ослабленных вакцинных вирусах были не единственными найденными. Эта проблема также вызывает серьезные сомнения относительно эффективности и безопасности вакцины. Этот результат займет больше времени, чем другие отчеты, потому что проверка последовательности мутантов должна быть сделана вручную.
  
  
• В ПРОЦЕССЕ - Межлабораторный подтверждающий анализ
  Мы определили зарубежные и национальные лаборатории, в которые мы заказали тиражирование анализа по стандарту. Этот результат будет доступен в ближайшее время.

Проекты в стадии оценки

Исследование эффективности вакцинных антигенов: это исследование должно проводиться в центре, аккредитованном регулирующими органами для доклинического исследования вакцин. Цель состоит в том, чтобы проверить, способны ли вакцинные антигены продуцировать или связываться со специфическими антителами (теоретически предполагается, что эти антитела являются защитными, но этот анализ не позволяет нам доказать, что вакцина способна защитить от заболевания). Стоимость этого шага может быть актуальной, поэтому проект в настоящее время является лишь гипотезой.

Скачать: CORVELVA-Report-на-результаты-obtained.pdf

Перевод команды CLiVa - www.clivatoscana.com