Вакцинегат: MRC-5 содержится в Priorix Tetra - полное секвенирование генома

Вакцинегат: MRC-5 содержится в Priorix Tetra - полное секвенирование генома

Эти последние анализы стали возможными благодаря активному вкладу французских ассоциаций Ассоциация Либерте Информация Санте (АБИС), Национальная лига вакцинации (LNPLV) и Австралийская ассоциация Австралийская сеть вакцинных рисков (AVN), что мы благодарим.


Секвенирование нового поколения стало предпочтительным инструментом для углубленного анализа в области биологии и медицины, особенно высокоточных. Благодаря этим инструментам мы можем подойти более современным и комплексным образом к ряду приложений, таких как секвенирование de novo, метагеномные и эпигеномные исследования, секвенирование транскриптома и повторное секвенирование генома.

Этот последний метод (повторное секвенирование) широко используется в человеческой сфере, как для исследований, так и для диагностических целей и состоит из NGS - секвенирования следующего поколения всего одного генома для картирования однонуклеотидных мутаций (SNP), вставок и удалений большего количества или менее длинные последовательности, которые возникли в определенных местах генома, и вариации в количестве копий геномных частей / генов (CNV, варианты количества копий). 

Эта процедура помогает понять механизм развития некоторых патологий, чтобы определить направления для будущего клинического лечения, как, например, в случае рака. Действительно, с помощью этого метода генетическое наследие больного раком может быть полностью расшифровано как в нормальной, так и в раковой ткани, что позволяет нам понять, что именно изменилось в геноме, и, если возможно, как вмешаться с целевыми мерами.

Процедура повторного секвенирования требует, чтобы ДНК человека была механически разбита на фрагменты небольшого размера (400-500 пар оснований), и к этим фрагментам были привязаны искусственные части ДНК, называемые адаптерами; адаптеры позволяют привязать фрагменты ДНК человека к стеклянной поверхности, на которой выполняется считывание оснований (A, C, G, T). Считывание пар оснований ДНК происходит посредством химических реакций, а именно включения нуклеотидов, которые были помечены флуоресцентными молекулами. Полученный таким образом миллион последовательностей (считываний) затем картируется на эталонном геноме человека с помощью специального программного обеспечения, и все варианты идентифицируются путем сравнения анализируемого генома с эталонным геномом.

Эта же процедура была проведена с геномом человека в Priorix® Tetra lot n. A71CB256A, геном которого принадлежит линии клеток MRC-5 (фетального происхождения); Работа была проведена компанией в США, которая обычно занимается анализом повторного секвенирования генома человека. *

* Название лаборатории, которая выполнила анализ, будет включено в следующую официальную жалобу, которую мы подадим в прокуратуру Рима, а также в регулирующие органы Италии и Европы. Ассоциации, которые подают анализ, финансируемый Corvelva, также будут своевременно информированы об этих шокирующих результатах. Мы не отрицаем, что чувствуем, особенно как родители, огорченными этими результатами, о которых сообщаем, - как будто того, что мы узнали до сих пор, было недостаточно, чтобы беспокоиться.


Результаты

Было установлено, что эталонный геном человека соответствует 99.76% считываний из ДНК вакцины, что означает почти во всей полноте. Фетальная ДНК человека, представленная в этой вакцине, представляет собой единый цельный геном, что означает, что вакцина содержит геномную ДНК со всеми хромосомами индивидуума мужского пола (фактически MRC-5 происходит от мужского плода).

Ниже приведены результаты анализа различных типов вариантов по сравнению с эталонным геномом человека.


Однонуклеотидный вариант (SNP - однонуклеотидный полиморфизм) и короткие вставки / делеции (InDels)

Варианты одноосновных оснований ДНК (SNP) представляют собой полиморфизмы, что означает мутации генетического материала одного нуклеотида. 

InDels вместо этого представляют собой небольшие вставки и делеции длиной менее 50 п.н. и представляют собой другой класс геномных вариантов в геноме человека.

В вакцинном геноме человека было идентифицировано 3.6 миллиона SNP (98.31% из которых уже зарегистрированы в общедоступной базе данных dbSNP и 61.805 804.000 новых, что означает оригинал в этой ДНК) и около 89.42 85.106 InDels (XNUMX% из которых уже зарегистрированы в dbSNP и XNUMX новый). 

Количество SNP соответствует тому, что было сообщено в литературе по «типичному человеческому геному», в то время как InDels приводит к большему количеству по сравнению с тем, что было сообщено «Консорциумом проекта 1000 геномов», а именно 800.000 600.000 по сравнению с XNUMX XNUMX .


CNV (варианты количества копий) и SV (структурные варианты)

Варианты количества копий (CNV) являются геномными вариантами из-за различий в количестве копий относительно больших фрагментов (длиннее 50 п.н.) между отдельными геномами. Существует два типа CNV: тип «усиление» (усиление копий) и тип «потеря» (потеря копий). 218 CNVs были обнаружены в геноме вакцинации человека, из которых 82 были "усилены" (покрывая часть генома из примерно 6.9 миллионов пар оснований) и 136 CNVs "потеряли" тип (покрывая часть генома примерно 70 миллион баз).

Как описано Консорциумом проекта 1000 геномов в «Глобальном справочнике по генетическим вариациям человека (Nature, vol. 526, 10)», типичный геном человека содержит от 2015 2,100 до 2,500 крупных вариантов, включая:

  • 1,000 больших удалений
  • 160 вариантов в количестве копий (CNV)
  • 10 инверсий

Которые вместе влияют на 20 миллионов оснований последовательности, учитывая также и вставки.

Как видно из коротких INDEL, даже в случае больших вставок и делеций, геном вакцины, следовательно, не соответствует «нормальному» геному человека, будучи гораздо более «реорганизованным», чем геном простого человека.


Круговое зрение генома (цирковой сюжет)

Ниже представлено графическое представление вакцинного генома, называемого «цирковой сюжет» (обычно используется для представления повторно секвенированного генома), наряду с другим, представляющим геном, повторно секвенированный из ДНК, извлеченной из крови здорового человека, - «нормальный» геном. :

Corvelva MRC5 4


Значение концентрических кругов

Corvelva MRC5 2

7) Самое центральное кольцо представляет собой вывод SV (структурные варианты) в областях экзона и сплайсинга. TRA (оранжевый, транслокации), INS (зеленый, вставки), DEL (удаления, серый), DUP (дублирование, розовый) и INV (инверсия, синий).

6) шестой кружок представляет логический вывод CNV (варианты номера копии). Красный цвет означает увеличение последовательности ДНК, а зеленый - потерю.

5) Пятое кольцо представляет пропорцию SNP в гомозиготности (оранжевый) и гетерозиготности (серый) в макете гистограммы.

4) Четвертое кольцо (зеленое) представляет плотность SNP в макете точечной диаграммы.

3) Третье кольцо (черное) представляет плотность INDEL в макете точечной диаграммы.

2) Второе кольцо (светло-синее) представляет покрытие показаний в макете гистограммы.

1) Внешний круг (первый круг) - это номер хромосомы.   

Приблизительное сравнение может также быть сделано между эмбриональной ДНК и ДНК клеток HeLa, иммортализованной клеточной линией, используемой также для производства вакцины против полиомиелита.

Corvelva MRC5 5

Обратите внимание, что транслокации клеток HeLa, представленные в цирковом графике линиями ядра, относятся ко всему геному (отсюда кодирующая и некодирующая части), в то время как в случае эмбриональных клеток вакцинации они относятся только к кодирующим генам. , 

Не нужно быть ученым, чтобы понять с первого взгляда, что геном вакцины не является геномом, который можно определить как «нормальный». Оранжевые линии, переплетенные в центре кружков, которых не так много в соответствующем кольце «нормального» генома, уже имеют смысл для аномалии этого генома.


Вариантный анализ в генах рака

Анализ вариантов SNP, InDels, CNV, SV для 560 генов, выбранных из-за того, что они вовлечены в различные формы рака человека, показывает наличие многочисленных «оригинальных» вариантов, то есть они даже не присутствуют в публичных базах данных, поэтому не известно в литературе. Другими словами, были идентифицированы важные модификации генов, о которых известно, что они связаны с различными формами опухолей, для всех 560 подтвержденных генов; кроме того, существуют варианты, последствия которых неизвестны, но которые, однако, влияют на гены, вовлеченные в индукцию рака человека.


Заключение

Геномная ДНК человека содержится в вакцине серии Приорикс. п. A71CB256A является явно аномальным, демонстрируя важные несоответствия по сравнению с типичным геномом человека, то есть геномом здорового человека. Существует несколько неизвестных вариантов (не отмеченных в публичных базах данных), и некоторые из них находятся в генах, участвующих в раке. По-видимому, аномальным также является избыток генома, который показывает изменения в количестве копий (CNV) и структурных вариантов (SV), таких как транслокации, вставки, делеции, дупликации и инверсии, многие из которых включают гены.

Потенциальный вклад многочисленных вариантов (не представленных в научной литературе и в публичных базах данных) в фенотип клеток, используемых для роста вакцинных вирусов, неизвестен.


Внутри PDF вы найдете все идеи, связанные также с последствиями для приветствия и переписки с EMA.


 Скачать: CORVELVA-MRC-5-содержал-в-Приорикс-тетра-Complete-генома секвенирования