Первые результаты по химическому составу профиля Infanrix Hexa

Первые результаты по химическому составу профиля Infanrix Hexa

Мы описываем некоторые моменты, которые нас интересуют, мы ожидаем, что когда мы начали эти анализы, от метагеномики до современной химии, у нас было много вопросов и мы искали только ответы ... с первыми результатами у нас есть еще больше вопросов и больше всего проблем!

Качественно-количественное исследование органических соединений имеет большое значение в фармакологической области. Существуют потенциальные проблемы безопасности, возникающие из-за новых производственных процессов и сложных структурных и биологических характеристик продуктов.

Следовательно, в вакцине были обнаружены следующие признаки:

  • Химическое загрязнение от производственного процесса или от перекрестного загрязнения с другими производственными линиями
  • Химические токсины
  • Бактериальные пептидные токсины
  • Нерастворимая и неусваиваемая макромолекула, которая реагирует на анализ белка, но не распознается базами данных белков

Наличие:

  • Белковые антигены дифтерийных анатоксинов, столбняка, коклюша, гепатита B, Haemophylus influenzae B, полиомиелита 1-2-3
  • Формальдегид и глутаровый альдегид, феноксиэтанол, остатки антибиотиков, указанные в составе

В вакцине Infanrix Hexa присутствуют шесть антигенов: токсины столбняка, дифтерия и коклюш, D-антигены трех вирусов полиомиелита, белки, полученные генной инженерией для гепатита B, и полисахариды гемофилуса, химически связанные с анатоксином столбняка. как перевозчик. Для образования токсоидов необходимо лечение формальдегидом и глутаральдегидом, что должно позволить устранить токсичность, сохраняя при этом их способность стимулировать защитные антитела против исходных токсинов.

Мы ожидали найти три токсоида и другие антигены, которые не были модифицированы обработкой формальдегидом и глутаральдегидом, отделялись друг от друга и усваивались специфическим ферментом для белков (трипсином). Вместо этого был найден реальный полимер, нерастворимый и неусваиваемый, состоящий из набора химически связанных антигенов (который должен быть определен, если он присутствует в виде совокупности отдельных антигенов или отдельной макромолекулы), информацию о которых также можно найти в литературе для отдельные антигены. 1-2
Эта макромолекула никак не распознается белковыми базами данных и, следовательно, фактически оказывается твердым соединением неизвестной химической структуры.

Растворимость белков и возможность их переваривать (т.е. разрезать на мелкие пептидные фрагменты) - это две типичные характеристики белков, которые позволяют нам не изучать их с помощью методов анализа белков. но также они являются необходимым требованием для взаимодействия с иммунной системой для образования защитных антителпотому что, если структура белка сильно изменяется по сравнению с исходным, образующиеся антитела полностью отличаются от тех, которые способны атаковать исходные антигены, вызывающие заболевания.
Поскольку этот полимер, с которым мы столкнулись, полученный из смеси антигенов, не только отличается с точки зрения пространственной конформации, но, прежде всего, он отличается с химической точки зрения, мы можем сказать, что мы находимся не в присутствии антигенов, похожих на исходные, но на соединение с неизвестной и непредсказуемой токсичностью и эффективностью.

В дополнение к тому факту, что вакцинные антигены фактически не были обнаружены, было обнаружено 65 сигналов химических загрязнителей, из которых 35% известны, то есть распознаются путем сравнения с базами данных; среди них мы находим различные остатки обработки и перекрестное загрязнение от других производственных линий, идентификация которых будет проверена в аналитическом анализе второго уровня (то есть со стандартами контроля).

Среди этих сигналов 7 химических токсинов также были идентифицированывозможно происходящие из процесса обработки антигена или из других производственных процессов, присутствующих на месте производства вакцины; эти токсины, еще не четко определенные в структуре, по-видимому, частично происходят из реакции формальдегида, глутаральдегида и цианогенбромида с другими химическими загрязнителями, присутствующими в вакцине. Подчеркивается, что большинство из этих токсинов имеют установленную и опубликованную токсичность в Pubchem 3 или Toxnet 4 e представляют значительную проблему безопасности.

Различные свободные пептиды (то есть короткие фрагменты аминокислотных цепей) бактериального происхождения были получены в результате изучения белковой и пептидной фракций, которые, следовательно, происходят из клеток бактериальной культуры для экстракции антигенов. Бактериальные пептиды описаны в литературе как потенциальные аллергены 5 и способен вызывать аутоиммунные реакции 6 и они также представляют вопрос безопасности, который необходимо прояснить с регулирующими органами.

Возвращаясь к двум основным столпам, которые заставили нас начать этот путь анализа, и повторяя концепцию, выраженную недавнее интервью в престижном научном журнале Nature: мы исследуем эффективность и безопасность вакцин, и в действительности трудно понять, как можно сказать, что эта вакцина способна образовывать защитные антитела против шести болезней, от которых мы защищаем себя и еще труднее понять, как можно установить, что этот кластер не токсичен у детей, поскольку речь идет о 6 нейротоксичных антигенах, связанных вместе.

Шестивалентная инфанриксная гекса из-за метода, который мы использовали, оставляет огромные сомнения как в ее эффективности, так и в ее безопасности ...

Уверяем вас в одном: мы не остановимся.


Скачать: CORVELVA-отчет-анализ-композиционно-химико-Infanrix-Hexa.pdf


Ссылки

  1. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2017 Jun 1; 1054: 80-92 - Комбинированное использование аналитических инструментов для исследования структур столбнячного токсина и столбнячного токсоида.
  2. Вакцины. 2007 8 марта; 25 (12): 2213-27. - Исследование механизма детоксикации токсина столбняка, обработанного формальдегидом.
  3. https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/search/
  4. https://toxnet.nlm.nih.gov/
  5. Int J Med Microbiol. 2018 авг; 308 (6): 738-750. - Квест на бактериальные аллергены.
  6. Фронт Микробиол. 2017 Oct 9; 8: 1938 - Патологические последовательности предполагают молекулярную мимикрию между микробными пептидами и самоантигенами: возможность вызывать аутоиммунитет.

Insights

Вакцина Infanrix Hexa имеет следующий состав, который мы достоверно копируем из настоящего технического паспорта паспорт производителя:

вакцинированная инфанрикс гекса 01


Показанный ниже антигенный препарат указан в отчете EMA для разрешения на продажу Infanrix Hexa. 1

Дифтерийный анатоксин: Дифтерийный анатоксин получают путем инактивации токсина (продуцируемого Corynebacterium diphtheriae) формальдегидом при 37 ° C в слабощелочной среде, а затем он адсорбируется на соли алюминия (гидроксид и фосфат).

Столбнячный анатоксин: Анатоксин столбняка получают по той же процедуре, что и дифтерийный анатоксин (Clostridium tetani является облигатной анаэробной спорогенной бактерией и вырабатывает тетаноспазмин, нейротропный токсин, который действует, блокируя синапсы, ингибирующие рефлекторное сокращение мышц).

Коклюшный анатоксин: компоненты бесклеточной коклюшной вакцины получают экстракцией и очисткой культур фазы I Bordetella pertossis (аэробного коккобацилла, способного продуцировать четыре токсина: токсин коклюша, аденилатциклазный токсин, дермонекротический токсин, трахеальный цитотоксин и два типа липополисахарида: для получения бесклеточной вакцины он очищает и использует только коклюшный токсин) с последующей необратимой детоксикацией токсина коклюша путем обработки глутаральдегидом и формальдегидом и обработки формальдегидом компонентов нитевидного гемагглютина и пертактина; различные компоненты затем адсорбируются на соли алюминия.

Поверхностный антиген гепатита В: он производится из генетически модифицированных культур Saccharomyces cerevisiae, кодирующих ген главного поверхностного антигена вируса гепатита В; этот антиген очищается с помощью различных химико-физических стадий и самопроизвольно собирается в сферические частицы диаметром около 20 нм, содержащие полипептидный антиген и фосфолипидную матрицу. Этот антиген затем адсорбируется на фосфате алюминия.

Вирус полиомиелита (инактивированный): Вакцина Солка, или инактивированный полиомиелит (IPV), основана на трех диких, вирулентных эталонных штаммах: Mahoney (полиовирус типа 1), MEF-1 (полиовирус типа 2) и Saukett (полиовирус типа 3), выращенных в ИСТИННАЯ клеточная линия: это иммортализованная клеточная линия, полученная в 1962 году из почек взрослых африканских обезьян (церкопитекинов); для производства вакцины клетки подвергают 130-140 пассажам для размножения (низкий уровень размножения), имейте в виду, что после 200 пассажей клеточная линия становится канцерогенной для мышей; культуральная среда для роста линии VERO имеет животное происхождение (и поэтому должна быть проверена на наличие вирусов и загрязняющих прионов), тогда как для роста вируса используется среда 199, которая не содержит веществ животного происхождения. После выделения и очистки живые вирусы инактивируются формальдегидом.
Из того, что известно EMA, вакцина содержит не вирусы как таковые, а белки, продуцируемые тремя штаммами, называемыми антигеном D; Эти белки образуются перед обработкой формальдегидом и глутаральдегидом, который выполняет функцию инактивации токсоидов и уничтожения всего генетического материала, поступающего из клеток Vero, потенциально канцерогенного, но также и вируса полиомиелита.

Полисахарид Haemophilus influenzae типа b: он приготовлен из бактериального штамма Hib 20,752 (существуют некапсулированные, не типируемые штаммы и капсулы, антигенно отличающиеся по 6 различным типам, названным буквами алфавита от a до f). Наиболее частые и менее серьезные инфекции, вызываемые Hib, те, которые воздействуют на верхние дыхательные пути и обычно поддерживаются некапсульными капсулами. Инвазивные инфекции, такие как менингит, вместо этого, главным образом, вызваны капсульными капсулами, особенно типом b)
Полисахарид получают в результате роста бактериального штамма в синтетической культуральной среде, и после активации бромидом цианогена и дериватизации гидразид-адиповым спейсером он связывается с анатоксином столбняка посредством карбамидной конденсации; после очистки конъюгат адсорбируется на соли алюминия и затем лиофилизируется в присутствии лактозы в качестве стабилизатора. Конъюгирование с анатоксином столбняка необходимо для придания полисахариду антигенности, поскольку он изменяет полисахарид с Т-независимого антигена на Т-зависимый антиген.

Готовый продукт: абсорбированные на алюминии DT, PT, FHA, PRN и HBsAg стерильные концентраты и трехвалентный компонент IPV ​​смешивают со стерильным раствором хлорида натрия и водой для инъекций и добавляют стерильный раствор 2-феноксиэтанола.
2-феноксиэтанол является противомикробным агентом и добавляется к готовому продукту, поскольку окончательная стерилизация фильтрацией компонента DTPa-HBV-IPV невозможна, а опалесценция суспензии может маскировать микробное загрязнение.