Мы описываем некоторые моменты, которые нас интересуют, мы ожидаем, что когда мы начали эти анализы, от метагеномики до современной химии, у нас было много вопросов и мы искали только ответы ... с первыми результатами у нас есть еще больше вопросов и больше всего проблем!

Качественно-количественное исследование органических соединений имеет большое значение в фармакологической области. Существуют потенциальные проблемы безопасности, возникающие из-за новых производственных процессов и сложных структурных и биологических характеристик продуктов.

Следовательно, в вакцине были обнаружены следующие признаки:

• Химическое загрязнение от производственного процесса или от перекрестного загрязнения с другими производственными линиями
• Химические токсины
• Бактериальные пептидные токсины
• Нерастворимая и неусваиваемая макромолекула, которая реагирует на анализ белка, но не распознается базами данных белков

Наличие:

• Белковые антигены дифтерийных анатоксинов, столбняка, коклюша, гепатита B, Haemophylus influenzae B, полиомиелита 1-2-3
• Формальдегид и глутаровый альдегид, феноксиэтанол, остатки антибиотиков, указанные в составе

В вакцине Infanrix Hexa присутствуют шесть антигенов: токсины столбняка, дифтерия и коклюш, D-антигены трех вирусов полиомиелита, белки, полученные генной инженерией для гепатита B, и полисахариды гемофилуса, химически связанные с анатоксином столбняка. как перевозчик. Для образования токсоидов необходимо лечение формальдегидом и глутаральдегидом, что должно позволить устранить токсичность, сохраняя при этом их способность стимулировать защитные антитела против исходных токсинов.

Мы ожидали найти три токсоида и другие антигены, которые не были модифицированы обработкой формальдегидом и глутаральдегидом, отделялись друг от друга и усваивались специфическим ферментом для белков (трипсином). Вместо этого был найден реальный полимер, нерастворимый и неусваиваемый, состоящий из набора химически связанных антигенов (который должен быть определен, если он присутствует в виде совокупности отдельных антигенов или отдельной макромолекулы), информацию о которых также можно найти в литературе для отдельные антигены. ^1-2
Эта макромолекула никак не распознается белковыми базами данных и, следовательно, фактически оказывается твердым соединением неизвестной химической структуры.

Растворимость белков и возможность их переваривать (т.е. разрезать на мелкие пептидные фрагменты) - это две типичные характеристики белков, которые позволяют нам не изучать их с помощью методов анализа белков. но также они являются необходимым требованием для взаимодействия с иммунной системой для образования защитных антител, потому что, если структура белка существенно изменяется по сравнению с исходной, даже образующиеся антитела полностью отличаются от тех, которые способны атаковать исходные антигены, вызывающие заболевания.

Поскольку этот полимер, с которым мы столкнулись, полученный из смеси антигенов, не только отличается с точки зрения пространственной конформации, но, прежде всего, он отличается с химической точки зрения, мы можем сказать, что мы находимся не в присутствии антигенов, похожих на исходные, но на соединение с неизвестной и непредсказуемой токсичностью и эффективностью.

В дополнение к тому факту, что вакцинные антигены фактически не были обнаружены, было обнаружено 65 сигналов химических загрязнителей, из которых 35% известны, то есть распознаются путем сравнения с базами данных; среди них мы находим различные остатки обработки и перекрестное загрязнение от других производственных линий, идентификация которых будет проверена в аналитическом анализе второго уровня (то есть со стандартами контроля).

Среди этих сигналов 7 химических токсинов также были идентифицированывозможно происходящие из процесса обработки антигена или из других производственных процессов, присутствующих на месте производства вакцины; эти токсины, еще не четко определенные в структуре, по-видимому, частично происходят из реакции формальдегида, глутаральдегида и цианогенбромида с другими химическими загрязнителями, присутствующими в вакцине. Подчеркивается, что большинство из этих токсинов имеют установленную и опубликованную токсичность в Pubchem ³ или Toxnet ⁴ e представляют значительную проблему безопасности.

Различные свободные пептиды (то есть короткие фрагменты аминокислотных цепей) бактериального происхождения были получены в результате изучения белковой и пептидной фракций, которые, следовательно, происходят из клеток бактериальной культуры для экстракции антигенов. Бактериальные пептиды описаны в литературе как потенциальные аллергены ⁵ и способен вызывать аутоиммунные реакции ⁶ и они также представляют вопрос безопасности, который необходимо прояснить с регулирующими органами.

Возвращаясь к двум основным столпам, которые заставили нас начать этот путь анализа, и повторяя концепцию, выраженную недавнее интервью в престижном научном журнале Nature: мы исследуем эффективность и безопасность вакцин, и в действительности трудно понять, как можно сказать, что эта вакцина способна образовывать защитные антитела против шести болезней, от которых мы защищаем себя и еще труднее понять, как можно установить, что этот кластер не токсичен у детей, поскольку речь идет о 6 нейротоксичных антигенах, связанных вместе.

Шестивалентная инфанриксная гекса из-за метода, который мы использовали, оставляет огромные сомнения как в ее эффективности, так и в ее безопасности ...

Уверяем вас в одном: мы не остановимся.

 Скачать: CORVELVA-отчет-анализ-композиционно-химико-Infanrix-Hexa.pdf

Ссылки

1. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2017 Jun 1; 1054: 80-92 - Комбинированное использование аналитических инструментов для исследования структур столбнячного токсина и столбнячного токсоида.
2. Вакцины. 2007 8 марта; 25 (12): 2213-27. - Исследование механизма детоксикации столбнячного токсина, обработанного формальдегидом.
3. https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/search/
4. https://toxnet.nlm.nih.gov/
5. Int J Med Microbiol. 2018 авг; 308 (6): 738-750. - Квест на бактериальные аллергены.
6. Фронт Микробиол. 2017 Oct 9; 8: 1938 - Патологические последовательности предполагают молекулярную мимикрию между микробными пептидами и самоантигенами: возможность вызывать аутоиммунитет.

Insights

Вакцина Infanrix Hexa имеет следующий состав, который мы достоверно копируем из настоящего технического паспорта паспорт производителя:

Показанный ниже антигенный препарат указан в отчете EMA для разрешения на продажу Infanrix Hexa. ¹

Дифтерийный анатоксин: Дифтерийный анатоксин получают путем инактивации токсина (продуцируемого Corynebacterium diphtheriae) формальдегидом при 37 ° C в слабощелочной среде, а затем он адсорбируется на соли алюминия (гидроксид и фосфат).

Столбнячный анатоксин: Анатоксин столбняка получают по той же процедуре, что и дифтерийный анатоксин (Clostridium tetani является облигатной анаэробной спорогенной бактерией и вырабатывает тетаноспазмин, нейротропный токсин, который действует, блокируя синапсы, ингибирующие рефлекторное сокращение мышц).

Коклюшный анатоксин: компоненты бесклеточной коклюшной вакцины получают путем экстракции и очистки культур фазы I Bordetella pertossis (аэробная коккобацилла, способная продуцировать четыре токсина: токсин коклюша, токсин аденилатциклазы, дермонекротический токсин, трахеальный цитотоксин. и два типа липополисахаридов; для приготовления бесклеточной вакцины очищают и используют только коклюшный токсин) с последующей необратимой детоксикацией коклюшного токсина путем обработки глутаральдегидом и формальдегидом и обработки формальдегидом нитчатых компонентов гемагглютинина и пертактина; Затем различные компоненты адсорбируются на солях алюминия.

Поверхностный антиген гепатита В: он производится из генетически модифицированных культур Saccharomyces cerevisiae, кодирующих ген главного поверхностного антигена вируса гепатита В; этот антиген очищается с помощью различных химико-физических стадий и самопроизвольно собирается в сферические частицы диаметром около 20 нм, содержащие полипептидный антиген и фосфолипидную матрицу. Этот антиген затем адсорбируется на фосфате алюминия.

Вирус полиомиелита (инактивированный): Вакцина Солка, или инактивированный полиомиелит (ИПВ), основана на трех диких вирулентных эталонных штаммах: Махони (полиовирус типа 1), MEF-1 (полиовирус типа 2) и Саукетт (полиовирус типа 3), выращенных в Клеточная линия VERO: это иммортализованная клеточная линия, полученная в 1962 г. из почек взрослых африканских обезьян (груши); для производства вакцины клетки подвергают 130-140 пассажам размножения (низкий уровень размножения), следует отметить, что после 200 пассажей линия клеток становится канцерогенной для мышей; питательная среда для роста линии VERO животного происхождения (и поэтому должна быть проверена на наличие заражающих вирусов и прионов), в то время как для роста вируса используется среда 199, которая не содержит веществ животного происхождения. После выделения и очистки живые вирусы инактивируются формальдегидом.
Из того, что известно EMA, вакцина содержит не вирусы как таковые, а белки, продуцируемые тремя штаммами, называемыми антигеном D; Эти белки образуются перед обработкой формальдегидом и глутаральдегидом, который выполняет функцию инактивации токсоидов и уничтожения всего генетического материала, поступающего из клеток Vero, потенциально канцерогенного, но также и вируса полиомиелита.

Полисахарид Haemophilus influenzae типа b: он приготовлен из бактериального штамма Hib 20,752 (существуют некапсулированные, не типируемые штаммы и капсулы, антигенно отличающиеся по 6 различным типам, названным буквами алфавита от a до f). Наиболее частые и менее серьезные инфекции, вызываемые Hib, те, которые воздействуют на верхние дыхательные пути и обычно поддерживаются некапсульными капсулами. Инвазивные инфекции, такие как менингит, вместо этого, главным образом, вызваны капсульными капсулами, особенно типом b)
Полисахарид получают в результате роста бактериального штамма в синтетической культуральной среде, и после активации бромидом цианогена и дериватизации гидразид-адиповым спейсером он связывается с анатоксином столбняка посредством карбамидной конденсации; после очистки конъюгат адсорбируется на соли алюминия и затем лиофилизируется в присутствии лактозы в качестве стабилизатора. Конъюгирование с анатоксином столбняка необходимо для придания полисахариду антигенности, поскольку он изменяет полисахарид с Т-независимого антигена на Т-зависимый антиген.

Готовый продукт: абсорбированные на алюминии DT, PT, FHA, PRN и HBsAg стерильные концентраты и трехвалентный компонент IPV ​​смешивают со стерильным раствором хлорида натрия и водой для инъекций и добавляют стерильный раствор 2-феноксиэтанола.
2-феноксиэтанол является противомикробным агентом и добавляется к готовому продукту, поскольку окончательная стерилизация фильтрацией компонента DTPa-HBV-IPV невозможна, а опалесценция суспензии может маскировать микробное загрязнение.