Première publication à comité de lecture sur les vaccins RORV (Priorix Tetra)

Première publication à comité de lecture sur les vaccins RORV (Priorix Tetra)

Enfin, nous voici, après près de deux ans, la première publication de nos analyses évaluée par des pairs, et de nombreuses autres vont être publiées.

Le but de cet article est de résumer les questions suivantes: ce qui a été publié, quelle est sa validité et pourquoi il est important pour notre enquête sur les vaccins. Tous ces arguments seront traités de manière familière et non technique dans les premières pages, tandis qu'à partir de la page 3, il y aura une étude technique afin de permettre aux spécialistes de ce secteur d'évaluer l'article en lui-même.

L'article publié sur "F1000 Research"1 est le résultat de l'étude initiale réalisée par l'un des laboratoires désignés par l'association Corvelva pour réaliser les analyses. Nous vous rappelons - car plus de deux ans se sont écoulés depuis le début de ces travaux et de nombreux autres résultats ont été ajoutés aux premiers - que le premier problème majeur que nous avons dû étudier était la quantité anormale d'ADN humain trouvée dans les vaccins analysés.

Les analyses initiales ont montré que les deux vaccins quadrivalents MMRV analysés contenaient de 1 à 2.7 microgrammes / flacon (tels que publiés dans le présent article) et nous avons décidé de rendre public et immédiatement de tels résultats car, simplement, il n'était pas prévu qu'une telle quantité de L'ADN pourrait être présent dans un vaccin.

Mis à part les considérations et conclusions de l'étude, qui sont strictement techniques et donc compréhensibles uniquement pour ceux qui travaillent dans le domaine de la recherche métagénomique, ce qui est observé dans les graphiques est que les deux échantillons de vaccin contiennent un pourcentage élevé de lectures d'ADN humain en plus de ceux attendus du génome du virus de la varicelle (Human alphaherpes virus 3), le seul détectable parmi quatre, comme un type d'analyse ADN-seq a été présenté dans l'article.

Cependant, nous tenons à souligner que les quantités d'ADN qui ont été trouvées et confirmées par la même méthode qui est maintenant validée ici étaient encore plus élevés: jusqu'à 3.7 microgrammes par flacon, conduisant à une différence considérable d'un lot à l'autre. En fait, dans notre rapport publié le 22 décembre 20182 les résultats obtenus à partir de l'analyse de différents lots de ceux discutés dans le présent article ont été rapportés, puis confirmés par des analyses interlaboratoires qui sont toujours en cours de publication.

Par conséquent, ce qui devrait être considéré comme d'un intérêt majeur dans la présente publication, c'est qu'elle valide la méthode que nous avons utilisée., donne un point important aux discussions sur le "type" d'analyse menée, et en conséquence il confirme de manière définitive toutes les études qui ont été réalisées ultérieurement avec la méthode NGS: l'analyse approfondie du type de matériel génétique, la présence de virus adventices, la grande absence de virus atténués qui devraient être présents et la quantité d'ADN humain qui était complètement hors de contrôle (également parce que très différente d'un échantillon à l'autre) , la population mutante, les phages, l'ADN d'autres espèces, etc. Vous pouvez trouver le aTous les résultats résumés sur notre site web3.

Tout ce que nous avons dénoncé ces dernières années, d'un point de vue biologique, en rapportant de manière approfondie les résultats aux organes de contrôle, prend une connotation scientifique plus pertinente (même si, nous le répétons encore une fois, ce ne sont pas les évaluations par les pairs qui ont dû inquiétude mais les données présentées, très sérieuses dans leur contenu et leurs possibles implications pour la santé humaine). Cependant, maintenant que la publication de la méthode est terminée, nous exigerons les réponses que nous n'avons pas encore données.

Ces résultats confirment incontestablement la présence d'ADN fœtal dans les vaccins Priorix tetra, en quantités variables d'un lot à l'autre, ce qui indique un contrôle de qualité médiocre de ces produits pharmaceutiques.

Nous tenons également à rappeler le rapport sur l'ensemble du séquençage du génome MRC-5 publié sur le site Web de Corvelva le 27 septembre 20194 montrant la modification profonde de cet ADN même dans des gènes liés au développement de maladies tumorales (ces données seront également bientôt publiées). L'ADN foetal contaminant trouvé dans tous les échantillons analysés en quantités variables (c'est-à-dire non contrôlées) est jusqu'à 300 fois plus élevé que la limite imposée par l'EMA pour l'ADN cancérigène (10 ng / dose, correspondant à l'ADN contenu dans environ 1000 cellules cancéreuses, sur la base d'un calcul statistique, alors que la limite de précaution est de 100 pg / dose), une limite qui doit nécessairement être également appliquée à l'ADN fœtal contaminant inévitablement le vaccin Priorix Tetra.

En conséquence, ce vaccin doit être considéré comme défectueux et potentiellement dangereux pour la santé humaine, en particulier pour la population pédiatrique qui est beaucoup plus vulnérable aux dommages génétiques et auto-immunes en raison de l'immaturité des systèmes immunitaires.

Comme prévu, la partie suivante de l'article est plus "technique" et difficile à comprendre pour les non-experts, c'est pourquoi nous avons décidé, même à des fins de transparence, de joindre à ce document "Dossier EMA - Dossier NGS Discussion sur les résultats de l'enquête sur la qualité des vaccins". Il nous a fallu extrapoler uniquement la partie qui pouvait être publiée, soit 50 pages du dossier contre 200 pages de la NGS, car une grande partie des informations contenues et enregistrées auprès des instances de régulation doivent rester confidentielles. La loi stricte de la science stipule qu'une information ne peut être publiée dans une revue que si elle est originale et puisque nous avons d'autres travaux en cours, nous ne voulons pas la mettre en danger.

Dossier EMA - NGS Discussion sur les résultats de l'enquête sur la qualité des vaccins ". - https://bit.ly/342XKi7

Enfin, pour éviter les malentendus, nous aimerions souligner la partie de la "Déclaration de financement" de la publication susmentionnée:

"Le séquençage métagénomique B1 et B2 a été financé par Corvelva (association à but non lucratif, Vénétie, Italie), dans le cadre d'un contrat de service avec le laboratoire. Aucune autre contribution n'a été impliquée dans le soutien des travaux. Les bailleurs de fonds n'ont joué aucun rôle dans la conception du étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier ou la préparation du manuscrit "


Ci-joint:


Dans l'article «Me convoitez-vous? Effet de la réduction de la couverture sur les études de séquençage du fusil à pompe métagénome "

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7059852/

Les auteurs abordent la question technico-méthodologique de savoir s'il est possible d'utiliser une approche métagénomique massivement parallèle avec une faible couverture de lecture pour caractériser des matrices biologiques complexes. Estimations de la diversité, de l'abondance des espèces et de la capacité de reconstruire le métagénome de novo en termes de longueur et d'exhaustivité sont calculés, afin de comprendre dans quelle mesure la diminution de la profondeur de séquençage, variée par des lectures de séquençage de sous-échantillonnage aléatoire, peut affecter les résultats finaux. Les résultats montrent que les indices de diversité des communautés procaryotes, eucaryotes et virales complexes peuvent être estimés avec précision avec 500,000 lectures ou moins, bien que des échantillons particulièrement complexes puissent nécessiter 1,000,000 de lectures, au contraire un projet impliquant la reconstruction du métagénome et des gènes qu'il contient nécessite plus de 1,000,000 XNUMX XNUMX de lectures.

Parmi les matrices complexes diverses et très différentes les unes des autres soumises à une analyse métagénomique massive, deux médicaments biologiques ont été inclus, à savoir deux lots différents de vaccin vivant atténué MPRV utilisé pour l'immunisation contre la rougeole, les oreillons, la rubéole et la varicelle chez les enfants. L'ADN a été extrait des vaccins, des bibliothèques génomiques ont été construites en utilisant des protocoles commerciaux standard et un séquençage massif a été effectué avec la technologie Illumina.

Outre les considérations et les conclusions auxquelles les travaux sont parvenus, qui sont strictement techniques et donc compréhensibles uniquement pour ceux qui font des recherches dans le domaine de la métagénomique, ce qui est observé dans les camemberts contenus dans les `` données étendues '' (https://osf.io/wq395/ échantillons B1 et B2) est que les deux échantillons de vaccin contenaient un pourcentage élevé de lectures d'ADN humain en plus de celles attendues du génome du virus de la varicelle (humain alpha-herpès virus 3), le seul détectable parmi les quatre, puisqu'une analyse de type ADN-seq a été présentée dans l'article.

71% des lectures dans un lot et 88% dans l'autre sont d'origine humaine, vraisemblablement dérivées de la lignée cellulaire fœtale MRC-5 (rappelez-vous que l'analyse ultérieure a confirmé que la lignée est MRC5) dans laquelle des virus vivants atténués de la rubéole et de la varicelle sont cultivé pendant la préparation du vaccin. De plus, comme cela s'est produit dans les différents lots du même vaccin MPRV testé par Corvelva entre 2017 et 2019, la quantité d'ADN extrait est de l'ordre du microgramme.

Dans les lots de vaccins testés avec les mêmes protocoles et technologies rapportés dans les matériaux et méthodes de l'article, les quantités détectées variaient de 1 à près de 3 microgrammes par flacon, quantités variant entre les lots, mais toujours significatives.

corvelva mprv1

B1 https://osf.io/86mbn/

corvelva mprv1

B2 https://osf.io/dxayz/

Dans le rapport publié par Corvelva le 22.12.2018 5, les résultats suivants ont été rapportés pour d'autres lots analysés après ceux discutés dans l'article, confirmés plus tard par une analyse interlaboratoires toujours en cours de publication.

Lot Priorix Tetra. A71CB205A (juin 2018) - Analyse d'ADN

corvelva mprv3

Lot Priorix Tetra. A71CB256A (décembre 2018) - Analyse ADN

corvelva mprv3

Analyse d'ADN

La mesure de la concentration d'ADN avec le fluorimètre QuBit a montré que le lot A71CB205A contient un total de 1.7 µg d'ADNg par dose de 0.5 ml, calculé comme suit: 9.41 ng / µl (concentration déterminée au QuBit) x 45 (volume final de remise en suspension d'ADN après extraction, exprimé en microlitres) x 4 (le volume de départ soumis à la procédure d'extraction est ¼ du volume de dose contenu dans le flacon entier de 0.5 ml).

La mesure de L'ADN avec le fluorimètre QuBit a montré que la A71CB256A lot contient un total ADNg de 3.7 µg par dose de 0.5 ml, calculé comme suit: 40.8 ng / µl (concentration déterminée au QuBit) x 55 (volume final de remise en suspension d'ADN après extraction exprimé en microlitres) x 5/3 (le volume de départ soumis à la procédure d'extraction est de 300 µl sur 500 µl de suspension ).

L'ADN humain trouvé dans ce lot est d'environ 8 à 1 par rapport à l'ADN de la varicelle (voir les résultats suivants de la classification des fragments d'ADN-seq, qui montrent que 88% du total des fragments d'ADN séquencés sont d'origine humaine et 11% sont du génome du virus de la varicelle).

Étant donné que le NGS est une technologie quantitative, la quantification fluorimétrique de l'ADN total extrait du vaccin (par exemple, lot A71CB256A = 3.7 microgrammes par dose), combinée à la prise en compte de la quantification relative ci-dessus (8: 1), nous permet de dire que l'homme L'ADN pourrait représenter environ 2.9 microgrammes par dose, contre environ 740 nanogrammes d'ADN de varicelle. Il est également plausible que au moins une partie de l'ADN de haut poids moléculaire vu sur gel pourrait être de l'ADN humain de haut poids moléculaire.

Analyse d'ARN

La quantité de ARN inclus dans le flacon de vaccin le lot A71CB256A s'est avéré être d'environ 200 ng.

Le RIN égal à 8 indique un excellente qualité ARN et ARN eucaryote intact, car les pics 18S et 28S typiques de l'ARN eucaryote sont présents.

Les réponses à nos questions transmises aux organismes de réglementation au fil du temps sont extrêmement importantes. Actuellement, les agences n'ont pas encore répondu aux questions concernant les résultats des analyses complètes fournies à l'EMA et à l'AIFA.

Extrait de la réponse donnée par l'EMA à notre question concernant la sécurité des résidus MRC-5 dans le vaccin Priorix® tetra (demande de référence EMA ask-43967 3 août 2018) - "Sur la base des informations publiées, Priorix® Tetra contient des souches virales produites séparément dans des cellules d'embryons de poulet (oreillons et rougeole) ou dans des cellules diploïdes humaines MRC-5 (rubéole et varicelle). Les lignées cellulaires utilisées pour Priorix® Tetra comprennent des lignées cellulaires diploïdes humaines qui ne peuvent pas se diviser en continu. Notez que, selon la Pharmacopée européenne, les lignées de cellules diploïdes MRC-5 ne sont pas tumorigènes, comme l'ont démontré des décennies d'utilisation et de contrôle, et donc la limite maximale pour l'ADN des cellules MRC-5 ne s'applique pas "

À ce jour, aucune preuve n'a été fournie (ni en termes de certificats d'analyse sur la qualité du produit, ni de documentation scientifique de référence pour l'EMA) de ces contrôles qui garantissent qu'il convient de ne pas appliquer de limite maximale.

Dans la directive de la FDA "Guide pour l'industrie: caractérisation et qualification des substrats cellulaires et autres matériaux biologiques utilisés dans la production de vaccins viraux pour les indications de maladies infectieuses"6 il est indiqué que:

  • une souche de cellules diploïdes doit toujours rester diploïde. Si ces caractéristiques ne sont pas stables, il est nécessaire de démontrer que l'instabilité ne nuit pas à la production ou à la conformité du produit.
  • pour les souches de cellules diploïdes humaines largement utilisées, telles que les cellules MRC-5 et WI-38, la mesure de l'ADN résiduel peut ne pas être nécessaire car nous ne considérons pas l'ADN résiduel de ces cellules diploïdes humaines comme un problème de sécurité
  • L'ADN résiduel doit être limité pour les cellules continues non tumorigènes, telles que les cellules VRAIES avec un faible nombre de passages, moins de 10 ng / dose pour l'inoculation parentérale comme recommandé par l'OMS

Et la ligne directrice de l'OMS "Annexe 3 - Recommandations pour l'évaluation des cultures de cellules animales en tant que substrats pour la fabrication de médicaments biologiques et pour la caractérisation des banques de cellules. Remplacement de l'annexe 1 de la série OMS de rapports techniques, n. 878 "ajoute: (...) une expérience considérable a été accumulée sur la cytogénétique des WI-38 et MRC-5 depuis les années 1960 et pour soutenir cette expérience, les articles suivants sont répertoriés:

  • Jacobs JP. Résultats actualisés sur la caryologie des souches cellulaires WI-38, MRC-5 et MRC-9. Developments in Biological Standardization, 1976, 37: 155–156.
  • Jacobs JP. et al. Lignes directrices pour l'acceptabilité, la gestion et les tests des cellules diploïdes humaines propagées en série pour la production de vaccins à virus vivants destinés à l'homme. Journal of Biological Standardization, 1981, 9: 331–342.
  • Petricciani JC et al. Normes de caryologie pour la lignée cellulaire diploïde rhésus DBS-FRhL-2. Journal of Biological Standardization, 1976, 4: 43–49.
  • Schollmayer et et al. Analyse haute résolution et condensation différentielle dans les chromosomes humains à bandes RBA. Human Genetics, 1981, 59: 187-193.
  • Rønne M. Préparation des chromosomes et techniques de bandes à haute résolution: une revue. Journal of Dairy Science, 1989, 72: 1363–1377.

On constate clairement que la littérature de référence qui soutient que les cellules diploïdes utilisées pour la production de vaccins sont sûres du point de vue de la stabilité génétique, est obsolète. Il y a déjà 40 ans, les premières anomalies génétiques, considérées comme négligeables pour la sécurité des vaccins, ont été trouvées et d'après ce qui est rapporté dans les directives de l'OMS, depuis lors aucune mise à jour n'a été faite avec les nouvelles technologies de séquençage, en particulier dans le NGS, qui est d'ailleurs économique et rapide, avec pour conséquence que dans les vaccins administrés depuis des décennies, les agences ont permis la présence d'ADN génétiquement modifié de plus en plus progressivement et en quantités incontrôlées. Sur ce sujet, voir le rapport sur le séquençage de l'ensemble du génome MRC-5 publié sur le site Internet de Corvelva le 27.09.2019 dans lequel la modification profonde de cet ADN est également évidente dans les gènes associés au développement de pathologies tumorales. (données en cours de publication)

Ci-dessous est rapporté un extrait de la lettre du Dr T. Deisher - expert mondial dans l'utilisation des cellules souches à des fins thérapeutiques et de thérapie génique -, qui souligne la préoccupation des risques associés à l'utilisation de vaccins contaminés par des résidus de cellules fœtales humaines :

Dr T. DEISHER (lettre aux gouverneurs - 8 avril 2019) - (...) injecter à nos enfants une contamination d'ADN fœtal humain comporte le risque de provoquer deux pathologies consolidées:

  • mutagenèse insertionnelle: l'ADN fœtal humain est incorporé dans l'ADN de l'enfant, provoquant des mutations. La thérapie génique utilisant la recombinaison homologue de petits fragments a montré que des quantités aussi petites que 1.9 ng / ml de fragments d'ADN entraînent l'insertion de cellules souches dans le génome chez 100% des souris injectées. Les niveaux de fragments d'ADN fœtal humain chez nos enfants après vaccination avec les vaccins ROR, VARIVAX (varicelle) ou contre l'hépatite A atteignent des niveaux supérieurs à 1.9 ng / ml.
  • maladie auto-immune: l'ADN fœtal humain stimule la réaction du système immunitaire pour attaquer le corps de l'enfant.

Nos résultats renforcent considérablement les observations expérimentales du Dr Deisher, surtout le fait que l'ADN fœtal contaminant présent dans tous les échantillons analysés en quantités variables (donc non contrôlées) est jusqu'à 300 fois plus élevé que la limite imposée par l'EMA pour l'ADN cancérigène (10 ng / dose, correspondant à l'ADN contenu dans environ 1000 cellules cancéreuses, obtenu sur la base d'un calcul statistique, alors que la limite de précaution est de 100 pg / dose) limite qui doit nécessairement être également appliquée à l'ADN fœtal qui contamine inévitablement la Priorix® Tetra.

Par conséquent, ce vaccin doit être considéré comme défectueux et potentiellement dangereux pour la santé humaine, en particulier dans la population pédiatrique qui est beaucoup plus vulnérable aux dommages génétiques et auto-immunes en raison de l'immaturité des systèmes de réparation.


  1. https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate/analisi-metagenomiche-su-priorix-tetra.html
  2. https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate.html
    https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate-en.html
  3. https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate/sequenziamento-del-genoma-completo-di-mrc-5-contenuto-in-priorix-tetra.html
  4. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7059852/
  5. https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate/analisi-metagenomiche-su-priorix-tetra.html
  6. https://www.federalregister.gov/documents/2010/03/04/2010-4553/guidance-for-industry-characterization-and-qualification-of-cell-substrates-and-other-biological