Opisujemo nekaj točk, ki nas zadevajo, predvidevamo, da smo imeli, ko smo se lotili teh analiz, od metagenomije do trenutne kemije, veliko vprašanj in iskali le odgovore ... s prvimi rezultati imamo še več vprašanj in predvsem pomislekov!

Kakovostno-kvantitativna raziskava organskih spojin je na farmakološkem področju zelo pomembna. Obstajajo morebitni varnostni problemi, ki izhajajo iz novih proizvodnih procesov in zapletenih strukturnih in bioloških lastnosti izdelkov.

Iz tega sledi, da so v cepivu našli naslednje:

• Kemična kontaminacija iz proizvodnega procesa ali navzkrižna kontaminacija z drugimi proizvodnimi linijami
• Kemični toksini
• Bakterijski peptidni toksini
• Netopna in neprebavljiva makromolekula, ki reagira na beljakovinski test, vendar ga baze podatkov o beljakovinah ne prepoznajo

Prisotnost:

• Proteinski antigeni toksidi difterije, tetanus, oslovski kašelj, hepatitis B, Haemophylus influenzae B, poliomielitis 1-2-3
• Formaldehid in glutaraldehid, fenoksietanol, ostanki antibiotikov, navedeni v sestavku

V cepivu Infanrix Hexa je šest antigenov: toksidi tetanusa, davice in oslovski kašelj, antigeni D treh poliomielitisov virusov, beljakovine, pridobljene z genskim inženiringom za hepatitis B, in polisaharidi hemofila, ki so kemijsko povezani s toksoidom tetanusa kot nosilec. Za tvorbo toksoidov je potrebno zdravljenje s formaldehidom in glutaraldehidom, ki naj bi odpravilo strupenost, hkrati pa ohranilo sposobnost stimuliranja zaščitnih protiteles proti prvotnim toksinom.

Pričakovali smo, da bomo našli tri toksoide in druge antigene, ki niso bili spremenjeni s tretmaji formaldehida in glutaraldehida, ločljivi drug od drugega in prebavljivi s specifičnim encimom za beljakovine (tripsin). Namesto tega so našli pravi polimer, netopen in neprebavljiv, sestavljen iz nabora kemično povezanih antigenov (ki jih je treba definirati, če so prisotni kot agregat posameznih antigenov ali ene same makromolekule), o katerih informacije najdemo tudi v literaturi za posameznih antigenov. ^1-2
Ta makromolekula ni na noben način prepoznala podatkovnih baz beljakovin, zato se dejansko izkaže za trdno spojino neznane kemijske strukture.

Topnost beljakovin in možnost njihove prebave (tj. Rezanje na drobne peptidne fragmente) sta dve značilni lastnosti proteinov, ki nam omogočata, da ju ne preučujemo z metodami za analizo beljakovin vendar so tudi nujna zahteva pri interakciji z imunskim sistemom za tvorbo zaščitnih protiteles, kajti če je struktura beljakovin močno spremenjena od prvotne, so celo nastala protitelesa popolnoma drugačna od tistih, ki lahko napadajo prvotne antigene, ki povzročajo bolezni.

Ker se ta polimer, ki smo ga srečali, izhaja iz mešanice antigenov, ni samo drugačen s stališča prostorske konformacije, ampak je predvsem s kemijskega vidika drugačen, lahko rečemo, da nismo v prisotnosti antigenov, podobnih prvotnim, ampak v spojini z neznano in nepredvidljivo strupenostjo in učinkovitostjo.

Poleg tega, da antigeni cepiva dejansko niso bili odkriti, je bilo najdenih 65 signalov kemičnih onesnaževalcev, od tega je znanih 35%, torej prepoznanih v primerjavi s podatkovnimi zbirkami; med njimi najdemo različne ostanke predelave in navzkrižno kontaminacijo z drugih proizvodnih linij, katerih identifikacija bo preverjena v analitični analizi druge stopnje (to je s standardi nadzora).

Med temi signali je bilo ugotovljenih tudi 7 kemičnih toksinovverjetno izvirajo iz procesa predelave antigena ali iz drugih proizvodnih postopkov, prisotnih na mestu proizvodnje cepiva; ti strupi, ki v strukturi še niso natančno opredeljeni, deloma izvirajo iz reakcije formaldehida, glutaraldehida in cianogenega bromida z drugimi kemičnimi onesnaževali, ki so prisotni v cepivu. Poudarja se, da ima večina teh toksinov ugotovljeno in objavljeno strupenost v Pubchemu ³ ali Toxnet ⁴ e predstavljajo velik varnostni problem.

Različni prosti peptidi (tj. Kratki fragmenti verig aminokislin) bakterijskega izvora so bili posledica preučevanja beljakovinske in peptidne frakcije, ki izvirajo iz celic bakterijske kulture za ekstrakcijo antigenov. Bakterijski peptidi so v literaturi navedeni kot možni alergeni ⁵ in lahko povzroči avtoimunske reakcije ⁶ in te tudi predstavljajo a varnostno vprašanje, ki ga bo treba razjasniti pri regulativnih agencijah.

Vrnitev na dva glavna stebra, zaradi katerih smo začeli to pot analize in ponovili koncept, ki ga je izrazil nedavni intervju v prestižni znanstveni reviji Nature: raziskujemo učinkovitost in varnost cepiv in v resnici je težko razumeti, kako je mogoče reči, da je to cepivo sposobno tvoriti zaščitna protitelesa proti šestim boleznim, za katere ščitimo sebe in še težje je razumeti, kako je mogoče ugotoviti, da ta grozd pri dojenčkih ni strupen, saj gre za 6 nevrotoksičnih antigenov, povezanih skupaj.

Šestvalentna infanrix hexa za metodo, ki smo jo naročili, pušča velike dvome tako glede njene učinkovitosti kot glede varnosti ...

Zagotavljamo vam eno stvar: ne bomo se ustavili.

 Prenos: CORVELVA-Report-analiza-sestava-kemično-Infanrix-Hexa.pdf

Reference

1. J Chromatogr B Analitik Technol Biomed Life Sci. 2017 1. junij; 1054: 80–92 - Kombinirana uporaba analitičnih orodij za raziskovanje struktur tetanusnih strupov in tetanusnih toksoidov.
2. Cepivo. 2007, 8. marec; 25 (12): 2213-27. - preiskava mehanizma razstrupljanja tetanusnega toksina, obdelanega s formaldehidom.
3. https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/search/
4. https://toxnet.nlm.nih.gov/
5. Int J Med Microbiol. 2018 avg; 308 (6): 738-750. - prizadevanje za bakterijske alergene.
6. Sprednji mikrobiol. 2017, oktober 9; 8: 1938 - Morbidna zaporedja predlagajo molekularno mimikrijo med mikrobnimi peptidi in samo-antigeni: možnost vključitve avtoimunosti.

Vpogled

Cepivo Infanrix Hexa ima naslednjo sestavo, ki jo zvesto prepisujemo iz tega tehničnega lista Podatkovni list proizvajalca:

Spodaj navedeni antigenski pripravek je tisti, ki je naveden v poročilu EMA za dovoljenje za promet z zdravilom Infanrix Hexa. ¹

Difterični toksoid: Toksoid difterije dobimo z inaktivacijo toksina (ki ga proizvaja Corynebacterium diphtheriae) s formaldehidom pri 37 ° C v rahlo alkalnem okolju, nato pa se adsorbira na aluminijeve soli (hidroksid in fosfat)

Tetanusni toksoid: Toksoid tetanusa dobimo z istim postopkom kot toksoid difterije (Clostridium tetani je vezana anaerobna sporogena bakterija in proizvaja tetanospasmin, nevrotropni toksin, ki deluje tako, da blokira sinapse in zavira refleksno krčenje mišic)

Pertusni toksoid: sestavine celičnega cepiva proti oslovskemu kašlju dobimo z ekstrakcijo in prečiščevanjem kultur I. faze Bordetella pertossis (aerobni kokobacil, ki lahko tvori štiri toksine: toksin oslovskega kašlja, toksin adenilat-ciklaze, dermonekrotični toksin, citotoksin sapnika in dve vrsti lipopolisaharida; za pripravo celičnega cepiva se očisti in uporablja samo toksin oslovskega kašlja), čemur sledi nepopravljiva razstrupljanje toksina oslovskega kašlja z obdelavo z glutaraldehidom in formaldehidom ter obdelava s formaldehidom nitastih hemaglutininov in pertaktina; nato se različne komponente adsorbirajo na aluminijeve soli.

Površinski antigen hepatitisa B: proizvaja se iz gensko spremenjenih kultur Saccharomyces cerevisiae, ki kodira glavni površinski gen virusa hepatitisa B; ta antigen se prečisti skozi različne kemijsko-fizikalne korake in se spontano sestavi v sferične delce premera približno 20 nm, ki vsebujejo polipeptidni antigen in fosfolipidni matriks. Ta antigen se nato adsorbira na aluminijev fosfat.

Virus polio (inaktiviran): Cepivo Salk ali inaktivirani otroški paralizem (IPV) temelji na treh divjih, virulentnih referenčnih sevih: Mahoney (poliovirus tipa 1), MEF-1 (poliovirus tipa 2) in Saukett (poliovirus tipa 3), gojen v Celična linija VERO: to je ovekovečena celična linija, pridobljena leta 1962 iz ledvic odraslih afriških opic (vervets); za izdelavo cepiva so celice izpostavljene 130-140 razmnoževalnim pasažam (nizka stopnja razmnoževanja), treba je opozoriti, da čez 200 prehodov celična linija pri miših postane rakotvorna; gojišče za rast linije VERO je živalskega izvora (in ga je zato treba preizkusiti na prisotnost onesnaževalnih virusov in prionov), medtem ko se medij 199 uporablja za rast virusa, ki ne vsebuje snovi živalskega izvora. Po izolaciji in prečiščevanju se živi virusi inaktivirajo s formaldehidom.
Glede na to, kar pozna EMA, cepivo ne vsebuje virusov kot take, ampak beljakovine, ki jih proizvajajo trije sevi, imenovani Antigen D; ti proteini nastanejo pred zdravljenjem s formaldehidom in glutaraldehidom, ki ima funkcijo inaktivacije toksoidov in uniči ves genetski material, ki prihaja iz celic Vero, potencialno kancerogen, pa tudi viruse poliomielitisa.

Polisaharid Haemophilus influenzae tipa b: pripravljen je iz bakterijskega seva Hib 20,752 (obstajajo kapsulirani, netipljivi sevi in ​​kapsule, antigeno ločene v 6 različnih vrstah, ki jih črke abecede imenujejo od a do f. Najpogostejše in manj resne okužbe, ki jih povzroča Hib, so tiste, ki prizadenejo zgornja dihala in jih običajno podpirajo kapsule brez kapsule. Invazivne okužbe, kot je meningitis, namesto tega večinoma povzročajo kapsule, zlasti tipa b)
Polisaharid dobimo z rastjo bakterijskega seva v sintetičnem gojišču in po aktivaciji s cianogenim bromidom in derivatizacijo s hidrazidno-adipinim distančnikom skupaj s toksoidom tetanusa s karbamidno kondenzacijo; po čiščenju se konjugat adsorbira na aluminijeve soli in nato liofilizira v prisotnosti laktoze kot stabilizatorja. Konjugacija s tetanusnim toksoidom je potrebna za dodelitev antigenosti polisaharidu, saj spremeni polisaharid iz T-neodvisnega antigena v T-odvisen antigen.

Končni izdelek: sterilne koncentrate, absorbirane na aluminiju DT, PT, FHA, PRN in HBsAg, in trivalentno komponento IPV pomešamo s sterilno raztopino natrijevega klorida in vodo za injiciranje ter dodamo s sterilno raztopino 2-fenoksietanola.
2-fenoksietanol je protimikrobno sredstvo in ga dodamo končnemu izdelku, ker končna sterilizacija s filtracijo komponente DTPa-HBV-IPV ni mogoča in lahko opalescenca suspenzije zakrije mikrobno kontaminacijo.