استهل

بادئ ذي بدء ، نود أن نشكر التعليقات المفيدة للغاية التي قدمها أولئك الذين استعرضوا نتائج التحليلات التي أجريت في سياق أنشطة البحث العلمي المتعلقة بمنتجات Priorix tetra و Infanrix Hexa. كانت القضايا الحرجة المعروضة مفيدة للغاية بالفعل من أجل إضافة تكامل تقني علمي قادر على توضيح العمل المنجز. نعتقد أنه لا يمكن الوصول إلى استنتاجات حول البيانات التي تم الحصول عليها والتي يمكن أن تكون مفيدة للمجتمع العلمي بأكمله وللأشخاص الذين يعالجونها ، إلا من خلال شركة سليمة للرؤى العلمية.

1. حالة من الفن

أدت الدراسات الأولية (الفحص غير الخاضع للتأكيد) للملف الجزيئي البيولوجي والتمثيل الغذائي والبروتيني ، التي أُجريت على منتجات Priorix Tetra و Infanrix Hexa ، إلى تكوين إطار ملخص في النقاط التالية:

1. وجود إشارات تحليلية مختلفة لا يمكن ربطها بمركبات معروفة من خلال البحث في قواعد بيانات Metlin 1-2 و KEGG3. لذلك ، ظهرت صورة مرتبطة بتعقيد كبير في تكوين المنتجات التجارية.
2. وجود البروتينات غير المعلنة في منشور في منتج Priorix Tetra. هذا الأخير يمكن أن يرتبط مع بقايا عملية الإنتاج
3. عدم اكتشاف المستضدات المعلن عنها في منتج Infanrix Hexa. تألفت تقنية التحليل من الهضم الأنزيمي مع التربسين المرتبط بتقنيات الطيف الكتلي. 4-5

أثارت هذه البيانات عدة تعليقات خاصة فيما يتعلق بالنقطة C - يتم في الواقع اكتشاف البروتين باستخدام نهج قياسي ، معترف به دوليا لأكثر من 10 سنوات 4 ، من الهضم من خلال انزيم التربسين 4. يتم فصل الببتيدات التي تم الحصول عليها وبالتالي تحليل كروماتوجرافي وتحليل الطيف الكتلي 4-5. كانت الملاحظة الرئيسية متأصلة في حقيقة أن اللقاحات تحتوي على مواد مساعدة من الألومنيوم يمكن أن تمنع عملية الهضم الأنزيمي. أتاحت البيانات التي تم الحصول عليها لاحقًا تقديم إيضاحات جوهرية ، لا سيما فيما يتعلق بالشكوى المعبر عنها في النقطة ج

2. رؤى جديدة وتحليل

2.1 رؤى متعلقة بتحليل منتج Infanrix Hexa

قبل الشروع في الرسم التوضيحي للبيانات الجديدة المكتسبة بشأن لقاحات Hexyon و Gardas 9 ، من الضروري الإجابة على السؤال المتعلق بالشك الذي أثير فيما يتعلق بتثبيط نشاط التحلل البروتيني للتربسين الناجم عن وجود المواد المساعدة التي أساسها الألمونيوم في Infanrix Hexa لقاح. في هذا الصدد ، يجب تحديد أن التحكم في الهضم موجود دائمًا في الهضم التجريبي. في الواقع ، فإن التربسين المستخدم في إجراء الهضم ، على الرغم من تصميمه لمنع التحلل الذاتي ، يحتوي على نسبة صغيرة من الأخير في حالة النشاط الأنزيمي يؤدي إلى الحصول على الجزء الذي يحتوي على m / z 842 وتسلسل الببتيد التالي: VATVSLPR. تم اكتشاف الجزء المذكور بالفعل ضمن عملية الهضم التريبتي لمنتج Infanrix Hexa كما يمكن التحقق منه بواسطة كروماتوجرام استخراج الأيونات (الشكل 1).

الشكل 1: كروماتوجرام استخراج الأيونات المرتبطة الأيوني مع نسبة م / ض 842 وجدت في عينة من الكثير المنتج Infanrix Hexa (الدفعة رقم A21CD072D).

علاوة على ذلك ، يتم إجراء تحكم خارجي عن طريق هضم الهيموجلوبين ، من أجل التحقق بشكل أكبر من جودة كمية التربسين المستخدمة. تم التعرف على الهيموغلوبين ، الذي تم تحليله في قسم التحليل الذي تمت فيه مراقبة المنتج ، بدرجة إحصائية كبيرة (log <- 100). أكدت هذه البيانات حقيقة أن نشاط الإنزيم كان موجودًا.

2.2 تحليلات جديدة بخصوص منتجات Hexyon و Gardasil

أدى تحليل منتجات Hexyon و Gardas 9 إلى اكتشاف الملامح الجزيئية المعقدة. في هذه الحالة ، ومع ذلك ، تم الكشف عن وجود معظم المستضدات المبلغ عنها في نشرة المعلومات. تم اكتشافها عن طريق الهضم التريبتي وبحضور المواد المساعدة.

هذه الحقيقة تقوي الدليل على أن رد فعل الهضم الثلاثي لا يتم تثبيته في وجود المواد المساعدة. في حالة لقاحات Hexyon و Gardas 9 ، كان السبب الرئيسي لتعقيد المظهر الجزيئي هو وجود العديد من الأنواع ذات الوزن الجزيئي المنخفض ، ولا يمكن التعرف عليها بواسطة قواعد البيانات المرجعية Metlin 1-2 و KEGG 3.

3. الاستنتاجات والاعتبارات النهائية

أدت التحليلات المنجزة إلى استنتاج ما يلي:

1. المظهر الجزيئي للقاحات التي تم تحليلها معقد بشكل عام وغير معروف إلى حد كبير.
2. هناك تلوثات البروتين ، لم يعلن عنها في النشرة ، التي تكوينها متغير.
3. في العديد من الحالات ، لم يتم اكتشاف المستضدات التي تم الإعلان عنها في النشرة. هذه الحقيقة يمكن أن تعزى إلى عدة عوامل. من بين الأخير ، يمكننا النظر في حساسية الطريقة المستخدمة. ومع ذلك ، نشعر أنه يمكننا استبعاد ظاهرة تثبيط الهضم بسبب وجود المواد المساعدة في صياغة اللقاح. في الواقع ، يتم تأكيد النشاط الأنزيمي بشكل أساسي من خلال وجود شظايا من التحسس الذاتي التجريبي ، ضمن حلول اللقاحات المهضومة (الرقابة الداخلية).

4. الدراسات المستقبلية

سيتم إجراء المزيد من الدراسات كجزء من أنشطة البحث والتطوير التي تهدف إلى استكشاف الجوانب التالية:

1. التركيب الجزيئي المرتبط بالبقايا الصلبة الموجودة في اللقاحات (تحليل MALDI TOF MS) ؛ 5
2. تقييم تركيز المعادن الموجودة في المنتجات.
3. تحليل المستوى الثاني لتأكيد وجود المركبات السامة المكتشفة في مرحلة الفحص. سيتم بعد ذلك ربط تركيزها بسمية نفسه وفقًا لما هو مذكور في أوراق بيانات السلامة الدولية. سيتم إجراء تحليلات المستوى الثاني وفقًا للتوجيه الأوروبي EU 2002/657 / EC ، وهو أمر مفيد لضمان معايير الجودة العالية في قطاع القياس الطيفي الشامل. 6

لوريتا بولجان

5. المراجع الببليوغرافية

1. Autenhahn R، Cho K، Uritboonthai W، Zhu Z، Patti G، Siuzdak G (September 2012). "سير عمل متسارع للأيضات غير المستهدفة باستخدام قاعدة بيانات METLIN". الطبيعة التكنولوجيا الحيوية. 30: 826-828. دوى: 10.1038 / nbt.2348. PMC 3666346. PMID 22965049.
2. Smith CA، I'Maille G، Want EJ، Qin C، Trauger SA، Brandon TR، Custodio DE، Abagyan R، Siuzdak G (December 2005). "METLIN: قاعدة بيانات طيفية للكتلة الأيضية" (PDF). هناك المخدرات مونيت. 27 (6): 747-51. دوى: 10.1097 / 01.ftd.0000179845.53213.39. بميد 16404815.
3. Kanehisa M (2013). "التطور الكيميائي والجيني لشبكات التفاعل المحفزة بالإنزيم". FEBS Lett. 587 (17): 2731–7.
4. Cristoni S، Bernardi LR. "المعلوماتية الحيوية في تحليل بيانات الطيف الكتلي لدراسات البروتينات". خبير Rev Proteomics. 2004 ديسمبر ؛ 1 (4): 469-83.
5. كريستوني إس ، برناردي إل آر. "تطوير منهجيات جديدة لدراسة قياس الطيف الكتلي للجزيئات الحيوية العضوية." ماس سبيكتروم القس .2003 نوفمبر - ديسمبر ؛ 22 (6): 369-406.
6. Cristoni S، Dusi G، Brambilla P، Albini A، Conti M، Brambilla M، Bruno A، Di Gaudio F، Ferlin L، Tazzari V، Mengozzi S، Barera S، Sialer C، Trenti T، Cantu M، Rossi Bernardi L، نونان دي إم. "SANIST: تحسين تقنية للتعرف على المركب استنادًا إلى توجيه الاتحاد الأوروبي مع تطبيقات في تحليلات الطب الشرعي والأدوية والغذائية." J. قداس الطيف. 2017 يناير ؛ 52 (1): 16-21. دوى: 10.1002 / jms.3895.

تنزيل: CORVELVA-النهائي التقني-Report.pdf

ترجم من قبل فريق CLiVa - www.clivatoscana.com