Chcemy wspólnie z Tobą podsumować sytuację. Minęło osiem miesięcy od lipca 2018 r. Iw tym czasie osiągnęliśmy niezwykle satysfakcjonujące wyniki. Przedstawiliśmy program badawczy, a jeśli chodzi o analizę szczepionek, jesteśmy w stanie przedstawić punkt odniesienia, z osiągniętymi celami, celami finalizowanymi i planowanymi na razie.

Po pierwsze, analizy 2 związków dla każdej szczepionki zostały zweryfikowane za pomocą standardów, przy użyciu certyfikowanych wzorców kontrolnych o stężeniu rzędu mikrogramów / ml. Wybrane przez nas związki należą do związków znanych z ich krytycznego profilu zagrożeń. Mówimy o ilości skumulowanej, łącznej ilości tych, które są rozpoznawane jako tożsamości i te, które mają zostać zidentyfikowane, które można oszacować w granicach 50 mikrogramów / ml, w przeciwieństwie do wytycznych EMA / FDA.

Testy te dały pozytywne wyniki, dlatego w pełni potwierdzają metodę analizy! Zaobserwowane zanieczyszczenia są prawdopodobnie spowodowane różnymi i zmiennymi zjawiskami i tematami procesu produkcyjnego. W toku badań zaobserwowano zmienność składu „międzyseryjnego”, co pozwala przypuszczać, że w całym procesie wytwarzania produktu występują trudne do kontrolowania etapy.

Takie analizy pozwoliły nam na osiągnięcie następujących kroków:

• Ocena zgodności składu zgodnie z arkuszem danych szczepionki
• Badania przesiewowe pod kątem zanieczyszczeń chemicznych i białkowych / peptydowych, a także tych pochodzących z materiału genetycznego
• Potwierdzające badanie związków chemicznych i białek docelowych za pomocą standardowych świadectw kontroli

Następujące szczepionki zostały poddane wstępnemu badaniu przesiewowemu:

• Infanrix Hexa - GlaxoSmithKline Biologicals sa
• Priorix Tetra - GlaxoSmithKline SpA
  
• Hexyon — Sanofi Pasteur Europe
• Gardasil 9 - szczepionki MSD

Te inne szczepionki zostały przeanalizowane jako wstępny przegląd:

• Szczepionka przeciw odrze żywa BP - Poonawalla Group (Profarma AG, Baar)
• MMR vax Pro - MSD Vaccins, Francja
• PolioInfanrix - GlaxoSmithKline, Belgia
• Fluad - Seqirus Srl, Siena
• Vivotif - PaxVax, Wielka Brytania

Użyte technologie

Badanie składa się z:

Analiza zanieczyszczeń i zanieczyszczeń chemicznych i białkowych

• System analizy LC-SACI / ESI-MS powiązany z pionierską platformą SANIST został wykorzystany do przeprowadzenia wstępnego badania przesiewowego identyfikacji interesujących szczepionek, a także do potwierdzenia go standardami kontrolnymi, przy minimalnym poziomie między nanogramami a mikrogramy / dawkę
• Technologia MALDI-TOF-MS została wykorzystana do badania nierozpuszczalnych makrocząsteczek znalezionych w szczepionkach

Analiza materiału genetycznego

• Test na obecność kwasów nukleinowych (DNA / RNA) pochodzenia ludzkiego i zwierzęcego oraz mikroorganizmów (wirusy, bakterie) przy użyciu metody sekwencjonowania nowej generacji, która umożliwiła kwantyfikację sekwencji materiału genetycznego zawartego w szczepionkach w wysoce specyficzny sposób i dokładny sposób
• Weryfikacja zgodności bakterii i żywych atenuowanych i inaktywowanych wirusów szczepionkowych sekwencji genomowych (obecność wariantów genetycznych)

Analiza ilościowa metali

• Technologia ICP-MS umożliwiła ilościowe oznaczenie metali obecnych w szczepionkach przy minimalnym limicie 5ng / dawkę.

Analiza zanieczyszczenia chemicznego i białkowego

Po pierwszym badaniu przesiewowym, w którym stwierdzono obecność setek sygnałów chemicznych wewnątrz szczepionek, przeprowadzono testy potwierdzające za pomocą standardów 2 związków na szczepionkę, z wykorzystaniem certyfikowanych standardów kontroli, wybranych spośród tych znanych z ich krytycznego profilu zagrożenia i dla ilość nie pozostała (tak, aby uznać ją za składniki szczepionek, dlatego należy ją uwzględnić w karcie danych technicznych i określić ilościowo).

Testy te dały pozytywne wyniki, dlatego w pełni potwierdzają metodę analizy. Jak dotąd tylko dwa związki zostały przetestowane wyłącznie ze względów ekonomicznych, w rzeczywistości badanie to nie jest kompletne, ponieważ jest ograniczone znacznymi kosztami badania, ale postanowiliśmy zidentyfikować bardziej odpowiednie normy dotyczące ograniczeń regulacyjnych i ma to na celu należy wziąć pod uwagę, że tego rodzaju dogłębne dochodzenie nie powinno przecież zależeć od nas.

Obserwowane zanieczyszczenia są najprawdopodobniej spowodowane różnymi i zmiennymi zjawiskami i tematami procesu produkcyjnego. To, co zaobserwowaliśmy na etapach badań, to zmienność składu między partiami, co pozwala przypuszczać, że istnieją pewne etapy w całym procesie wytwarzania produktu, które są trudne do kontrolowania. stężenie jest rzędu mikrogramów / ml. Jeśli chodzi o ilość skumulowaną, można oszacować na podstawie oceny półilościowej (ponieważ większość związków jest nieznana), że zanieczyszczenia są rzędu 50 μg / ml. To ważne dane, ponieważ wytyczne EMA / FDA są na ten temat bardzo jasne. Zanieczyszczenia nie powinny występować (poniżej poziomu wykrywalności) lub jeśli występują, należy je dobrze zidentyfikować i należy udowodnić, że są stosowane odpowiednie metody ich redukcji. W tym przypadku zanieczyszczenia nie są poniżej poziomu możliwości urządzenia wykrywającego (ng / ml), więc uważamy, że producent nie stosuje żadnych metod oczyszczania. Jeśli chodzi o obecność przypadkowych wirusów, problem nie istnieje, ponieważ nie mogą one w ogóle występować.

• W TRAKCIE - Trwają międzylaboratoryjne analizy potwierdzające tych związków.
  Związki zidentyfikowane przez normę zostaną ponownie potwierdzone przy użyciu tej samej technologii przez różne laboratoria. Jednym z naszych celów jest koordynacja tego projektu również przy wsparciu i współpracy międzynarodowych stowarzyszeń.
  
  
• W TRAKCIE - Badanie kinetyki opadów antygenów związanych z aluminium.

Analiza metagenomiczna

• W TRAKCIE - Analiza z dodatkowymi standardami kontroli DNA i RNA innej partii szczepionki.
  Od początku tego projektu było dla nas jasne, że analizy, aby spełnić niezbędne wymagania dotyczące powtarzalności i dokładności danych, musiały być przeprowadzane przy użyciu najbardziej zaawansowanego oprzyrządowania oraz poprzez monitorowanie wszelkich różnic w obrębie tej samej partii i między różnymi partii. W trakcie dochodzeń inne części są stale analizowane, oczywiście pod kątem budżetu i dostępności produktów.
  
  
• W TOKU - Analiza sekwencji genomu DNA płodu z linii komórkowej MRC-5.
  Ponieważ od pierwszego skriningu mieliśmy okazję zweryfikować standardowo, czy zastosowane linie diploidalne to MRC-5, jak podano w karcie danych technicznych. Chcielibyśmy pogłębić badanie tej linii komórkowej również ze względu na fakt, że jej obecność jest niezwykła pod względem ilości i wymiarów.
  
  
• W TRAKCIE - Badanie drobnych wariantów (quasispecies) wirusów odry, świnki i różyczki.
  W porównaniu z pierwszym sprawozdaniem z lipca 2018 r. (https://bit.ly/2UCC2iS) zleciliśmy dogłębne badanie mniejszych wariantów, ponieważ mutacje w atenuowanych wirusach szczepionkowych nie były jedynymi stwierdzonymi. Również ten problem budzi poważne wątpliwości dotyczące skuteczności i bezpieczeństwa szczepionki. Ten wynik zajmie więcej czasu niż inne raporty, ponieważ weryfikacja sekwencji mutantów musi być wykonana ręcznie.
  
  
• W TRAKCIE - analiza potwierdzeń międzylaboratoryjnych
  Zidentyfikowaliśmy zagraniczne i krajowe laboratoria, w których zleciliśmy replikację analizy standardowo. Ten wynik będzie dostępny wkrótce.

Projekty w trakcie oceny

Badanie siły działania antygenów szczepionkowych: badanie to musi zostać przeprowadzone w ośrodku akredytowanym przez agencje regulacyjne do badań przedklinicznych szczepionek. Celem jest sprawdzenie, czy antygeny szczepionkowe są zdolne do wytwarzania lub wiązania się ze specyficznymi przeciwciałami (teoretycznie zakłada się, że te przeciwciała są ochronne, ale ta analiza nie pozwala nam udowodnić, że szczepionka jest w stanie chronić przed chorobą). Koszt tego kroku może być istotny, więc projekt jest obecnie tylko hipotezą.

Download: CORVELVA-Report-on-the-WYNIKI obtained.pdf

Przetłumaczone przez zespół CLiVa - www.clivatoscana.com