inleiding

Allereerst willen we de zeer nuttige opmerkingen bedanken van degenen die de resultaten van de analyses hebben beoordeeld in het kader van wetenschappelijke onderzoeksactiviteiten met betrekking tot Priorix tetra en Infanrix Hexa-producten. De gepresenteerde kritieke kwesties waren inderdaad zeer nuttig om technisch-wetenschappelijke integraties toe te voegen die het verrichte werk konden verduidelijken. Wij zijn van mening dat alleen via een gezonde gemeenschap van wetenschappelijke visies conclusies kunnen worden getrokken over de verkregen gegevens die nuttig kunnen zijn voor de hele wetenschappelijke gemeenschap en voor de mensen die zich erop richten.

1. Stand van zaken

Voorlopige studies (screening niet onderworpen aan bevestiging) van het biomoleculaire, metabolomische en proteomische profiel, uitgevoerd op Priorix Tetra- en Infanrix Hexa-producten, hebben geleid tot een samenstellingskader dat is samengevat in de volgende punten:

1. Aanwezigheid van verschillende analysesignalen die niet kunnen worden geassocieerd met bekende verbindingen door onderzoek naar de Metlin 1-2- en KEGG3-databases. Daarom ontstond een beeld dat gepaard ging met een aanzienlijke complexiteit in de samenstelling van commerciële producten.
2. Aanwezigheid van eiwitten die niet worden vermeld in een folder in het Priorix Tetra-product. Dit laatste kan mogelijk worden geassocieerd met residuen van het productieproces
3. Niet-detectie van de antigenen die zijn aangegeven in het Infanrix Hexa-product. De analysetechniek bestond uit enzymatische digestie met trypsine geassocieerd met massaspectrometrische technieken. 4-5

Deze gegevens hebben verschillende opmerkingen opgeleverd, vooral met betrekking tot punt C - Eiwitdetectie wordt in feite uitgevoerd met behulp van een standaardbenadering, internationaal erkend gedurende meer dan 10 jaar 4, van digestie door het trypsine-enzym 4. De aldus verkregen peptiden worden chromatografisch gescheiden en geanalyseerd door massaspectrometrie 4-5. De belangrijkste waarneming is inherent aan het feit dat er in de vaccins op aluminium gebaseerde adjuvantia zijn die mogelijk het enzymatische spijsverteringsproces kunnen remmen. De verkregen gegevens hebben het vervolgens mogelijk gemaakt om substantiële verduidelijkingen te verschaffen, met name met betrekking tot de in punt C geuite klacht.

2. Nieuwe inzichten en analyses

2.1 Inzichten met betrekking tot de analyse van het Infanrix Hexa-product

Voordat we verder gaan met de illustratie van de nieuwe verkregen gegevens over Hexyon en Gardas 9-vaccins, is het essentieel om de vraag te beantwoorden over de twijfel die is gerezen over de remming van de proteolytische activiteit van trypsine veroorzaakt door de aanwezigheid van op aluminium gebaseerde adjuvantia in de Infanrix Hexa vaccin. In dit verband moet worden gespecificeerd dat een verteringscontrole altijd aanwezig is in de tryptische vertering. In feite heeft het trypsine dat wordt gebruikt om de spijsvertering uit te voeren, hoewel het is ontworpen om autolyse te voorkomen, een klein percentage van het laatste dat in het geval van enzymatische activiteit leidt tot het verkrijgen van het fragment met m / z 842 en de volgende peptidesequentie: VATVSLPR. Dit fragment werd feitelijk gedetecteerd binnen de tryptische digestie van het Infanrix Hexa-product als verifieerbaar door het ionextractiechromatogram (figuur 1).

Figuur 1: Ion-geassocieerd ionisch extractiechromatogram met een m / z 842-verhouding gevonden in het monster van de Infanrix Hexa-productpartij (batch nr. A21CD072D).

Bovendien wordt een externe controle uitgevoerd door hemoglobine te verteren, om de goedheid van de gebruikte partij trypsine verder te verifiëren. Hemoglobine, geanalyseerd in het analysegedeelte waarin het product werd gevolgd, werd herkend met een significante statistische score (loge <- 100). Deze gegevens bevestigden het feit dat de enzymactiviteit aanwezig was.

2.2 Nieuwe analyses met betrekking tot Hexyon en Gardasil-producten

De analyse van Hexyon en Gardas 9-producten leidde tot de detectie van complexe moleculaire profielen. In dit geval werd echter de aanwezigheid van de meeste in de bijsluiter gerapporteerde antigenen gedetecteerd. Ze werden gedetecteerd door tryptische digestie en in aanwezigheid van adjuvantia.

Dit feit versterkt verder het bewijs dat de triptica-digestiereactie niet wordt geremd in aanwezigheid van adjuvantia. In het geval van Hexyon- en Gardas 9-vaccins werd de complexiteit van het moleculaire profiel voornamelijk toegeschreven aan de aanwezigheid van talloze soorten, met een laag molecuulgewicht, niet identificeerbaar door de referentiedatabases Metlin 1-2- en KEGG 3.

3. Conclusies en slotoverwegingen

De uitgevoerde analyses hebben geleid tot de conclusie:

1. Het moleculaire profiel van de geanalyseerde vaccins is over het algemeen complex en grotendeels onbekend.
2. Er zijn eiwitverontreinigingen, niet vermeld in de bijsluiter, waarvan de samenstelling variabel is.
3. In verschillende gevallen zijn de in de bijsluiter aangegeven antigenen niet gedetecteerd. Dit feit kan aan verschillende factoren worden toegeschreven. Onder deze laatste kunnen we de gevoeligheid van de gebruikte methode beschouwen. We denken echter dat we het fenomeen van spijsverteringsremming kunnen uitsluiten vanwege de aanwezigheid van adjuvantia in de formulering van het vaccin. In feite wordt de enzymatische activiteit voornamelijk bevestigd door de aanwezigheid van fragmenten van tryptische autolyse, in de oplossingen van de verteerde vaccins (interne controle).

4. Toekomstige studies

Verdere studies zullen worden uitgevoerd als onderdeel van de onderzoeks- en ontwikkelingsactiviteiten gericht op het onderzoeken van de volgende aspecten:

1. macromoleculaire samenstelling geassocieerd met vaste residuen aanwezig in vaccins (MALDI TOF MS-analyse); 5
2. evaluatie van de concentratie van de metalen in de producten.
3. Tweede niveau-analyse om de aanwezigheid van toxische verbindingen te detecteren die in de screeningsfase zijn gedetecteerd. Hun concentratie zal dan gerelateerd zijn aan de toxiciteit ervan volgens hetgeen vermeld staat op de internationale veiligheidsinformatiebladen. De analyses op het tweede niveau zullen worden uitgevoerd in overeenstemming met de Europese richtlijn EU 2002/657 / EG, nuttig om hoge kwaliteitsnormen in de massaspectrometrische sector te garanderen. 6

Loretta Bolgan

5. Bibliografische verwijzingen

1. Autenhahn R, Cho K, Uritboonthai W, Zhu Z, Patti G, Siuzdak G (september 2012). "Een versnelde workflow voor niet-doelgerichte metabolomics met behulp van de METLIN-database". Natuurbiotechnologie. 30: 826–828. doi: 10.1038 / nbt.2348. PMC 3666346. PMID 22965049.
2. Smith CA, I'Maille G, Want EJ, Qin C, Trauger SA, Brandon TR, Custodio DE, Abagyan R, Siuzdak G (december 2005). "METLIN: een metaboliet-massaspectrale database" (PDF). Ther Drug Monit. 27 (6): 747-51. doi: 10.1097 / 01.ftd.0000179845.53213.39. PMID 16404815.
3. Kanehisa M (2013). "Chemische en genomische evolutie van enzymgekatalyseerde reactienetwerken". FEBS Lett. 587 (17): 2731-7.
4. Cristoni S, Bernardi LR. "Bio-informatica in massaspectrometrie data-analyse voor proteomics studies." Expert Rev Proteomics. December 2004; 1 (4): 469-83.
5. Cristoni S, Bernardi LR. "Ontwikkeling van nieuwe methodologieën voor de massaspectrometrische studie van bio-organische macromoleculen." Massaspectrom rev. 2003 nov-dec; 22 (6): 369-406.
6. Cristoni S, Dusi G, Brambilla P, Albini A, Conti M, Brambilla M, Bruno A, Di Gaudio F, Ferlin L, Tazzari V, Mengozzi S, Barera S, Sialer C, Trenti T, Cantu M, Rossi Bernardi L, Noonan DM. "SANIST: optimalisatie van een technologie voor de identificatie van verbindingen op basis van de richtlijn van de Europese Unie met toepassingen in forensische, farmaceutische en voedselanalyses." J. Mass Spectrom. Januari 2017; 52 (1): 16-21. doi: 10.1002 / jms.3895.

Download link: CORVELVA-Final-Technical-report.pdf

Vertaald door CLiVa-team - www.clivatoscana.com