We willen de situatie samen met u inventariseren. Acht maanden zijn verstreken sinds juli 2018 en in deze periode hebben we buitengewoon bevredigende resultaten bereikt. We hebben een onderzoeksprogramma gepresenteerd en met betrekking tot de analyse van vaccins kunnen we een referentiepunt maken, met de behaalde doelstellingen, die worden afgerond en die alleen voor nu zijn gepland.

Om te beginnen zijn de analyses van 2 verbindingen voor elk vaccin geverifieerd door middel van standaarden, met behulp van gecertificeerde controlestandaarden met een concentratie in de orde van microgram / ml. De verbindingen die we hebben gekozen, behoren tot de verbindingen die bekend staan ​​om hun kritische gevarenprofiel. We hebben het over een cumulatieve hoeveelheid, een totaal aantal van degenen die als identiteiten worden herkend en die moeten worden geïdentificeerd, dat kan worden geschat in de orde van grootte van 50 microgram / ml, in tegenstelling tot de richtlijnen van de EMA / FDA.

Deze tests hebben positieve resultaten opgeleverd, daarom bevestigen ze de analysemethode volledig! De waargenomen verontreinigingen zijn waarschijnlijk het gevolg van verschillende en variabele fenomenen en onderwerpen van het fabricageproces. Wat in de loop van de onderzoeken is waargenomen, is een variatie van de samenstelling tussen batches, waardoor we aannemen dat sommige stappen in het hele productieproces van het product moeilijk te beheersen zijn.

Met dergelijke analyses hebben we de volgende stappen kunnen uitvoeren:

• Conformiteitsbeoordeling van de samenstelling zoals beschreven in het vaccingegevensblad
• Screening op chemische en eiwit- / peptideverontreinigingen, evenals op genetisch materiaal
• Bevestigende studie van chemische en eiwitdoelverbindingen door middel van standaard inspectiecertificaten

De volgende vaccins zijn onderworpen aan een eerste screening:

• Infanrix Hexa - GlaxoSmithKline Biologicals sa
• Priorix Tetra - GlaxoSmithKline SpA
  
• Hexyon - Sanofi Pasteur Europa
• Gardasil 9 - MSD-vaccins

Deze andere vaccins werden geanalyseerd als initiële screening:

• Mazelenvaccin levend BP - Poonawalla Group (Profarma AG, Baar)
• MMR vax Pro - MSD Vaccins, Frankrijk
• PolioInfanrix - GlaxoSmithKline, België
• Fluad - Seqirus Srl, Siena
• Vivotif - PaxVax, Verenigd Koninkrijk

Gebruikte technologieën

Het onderzoek is gestructureerd in:

Analyse van onzuiverheden en chemische en eiwitverontreiniging

• Het LC-SACI / ESI-MS-analysesysteem dat is gekoppeld aan het baanbrekende SANIST-platform is gebruikt om een ​​eerste identificatiescreening uit te voeren op de vaccins van belang, en om dit te bevestigen met de controlestandaarden, met een minimumniveau tussen de nanogrammen en microgram / dosis
• MALDI-TOF-MS-technologie is gebruikt om de onoplosbare macromoleculen in de vaccins te bestuderen

Analyse van genetisch materiaal

• Test op de aanwezigheid van nucleïnezuren (DNA / RNA) van menselijke en dierlijke oorsprong en van micro-organismen (virussen, bacteriën) met behulp van de Next Generation Sequencing-methode, die het mogelijk maakte om de genetische materiaalsequentie in de vaccins te kwantificeren in een zeer specifieke en nauwkeurige manier
• Controle van de overeenstemming van bacteriën en levende verzwakte en geïnactiveerde vaccinvirussen, genomische sequenties (aanwezigheid van genetische varianten)

Kwantitatieve analyse van metalen

• De ICP-MS-technologie maakte het mogelijk om de metalen in de vaccins te kwantificeren met een minimumlimiet van 5 ng / dosis.

Analyse van chemische en eiwitverontreiniging

Na een eerste screening die de aanwezigheid van honderden chemische signalen in de vaccins had geïdentificeerd, werden bevestigingstests uitgevoerd door middel van normen van 2 verbindingen per vaccin, met behulp van gecertificeerde controlenormen, gekozen uit die bekend om hun kritische gevarenprofiel en voor de niet-resterende hoeveelheid (zoals te beschouwen als componenten van de vaccins, moet daarom in het technische informatieblad worden opgenomen en worden gekwantificeerd).

Deze tests hebben positieve resultaten opgeleverd en bevestigen daarom de analysemethode volledig. Tot dusverre zijn slechts twee verbindingen uitsluitend om economische redenen getest, in feite is deze studie niet compleet, omdat deze wordt beperkt door de aanzienlijke kosten van de enquête, maar we hebben ervoor gekozen om de relevantere normen voor de wettelijke beperkingen te identificeren en menen dat dit soort diepgaand onderzoek niet aan ons is.

De waargenomen verontreinigingen zijn hoogstwaarschijnlijk te wijten aan verschillende en variabele fenomenen en onderwerpen van het fabricageproces. Wat we tijdens de onderzoeksstappen hebben waargenomen, is een variatie tussen de partijen van de samenstelling, waardoor we aannemen dat er enkele stappen zijn in het hele productieproces van het product die moeilijk te beheersen zijn. Gezien de gebruikelijke analytische factoren kan worden aangenomen dat de concentratie is in de orde van microgram / ml. Wat betreft de cumulatieve hoeveelheid is het mogelijk om op basis van een semi-kwantitatieve evaluatie (aangezien de meeste verbindingen onbekend zijn) te schatten dat de verontreinigingen in de orde van grootte van 50 μg / ml liggen. Dit zijn belangrijke gegevens omdat de richtlijnen van de EMA / FDA er heel duidelijk over zijn. Verontreinigingen mogen niet aanwezig zijn (onder het detectieniveau) of, indien aanwezig, moeten ze goed worden geïdentificeerd en er moet bewezen worden dat geschikte methoden om ze te verminderen worden toegepast. In dit geval zijn de verontreinigingen niet onder het capaciteitsniveau van het detectieapparaat (ng / ml), dus we denken dat de producent geen zuiveringsmethoden toepast. Wat betreft de aanwezigheid van onvoorziene virussen, bestaat het probleem niet, omdat ze helemaal niet aanwezig mogen zijn.

• LOPEND - Interlaboratoriumbevestigingsanalyses van deze verbindingen zijn aan de gang.
  De verbindingen die door standaard worden geïdentificeerd, zullen door verschillende laboratoria met dezelfde technologie opnieuw worden bevestigd. Een van onze doelen is om dit project ook te coördineren met de steun en medewerking van internationale verenigingen.
  
  
• LOPEND - Studie van de neerslagkinetiek van aluminiumgebonden antigenen.

Metagenomische analyse

• LOPEND - Analyse met aanvullende DNA- en RNA-controlenormen van een andere vaccinbatch.
  Vanaf het begin van dit project was het ons duidelijk dat de analyses, om te voldoen aan de noodzakelijke vereisten van de repliceerbaarheid en de nauwkeurigheid van de gegevens, moesten worden uitgevoerd met de meest geavanceerde instrumentatie en door eventuele diversiteit binnen dezelfde batch en tussen verschillende batches. Terwijl we doorgaan met het onderzoek, worden andere partijen continu geanalyseerd, uiteraard binnen het budget en de beschikbaarheid van producten.
  
  
• IN UITVOERING - Sequentieanalyse van foetaal DNA-genoom van de MRC-5-cellijn.
  Sinds de eerste screening hadden we de mogelijkheid om standaard te verifiëren dat de gebruikte diploïde lijnen MRC-5 waren, zoals vermeld in het technische gegevensblad. We willen de studie van deze cellijn ook verdiepen vanwege het feit dat de aanwezigheid ervan opmerkelijk is in hoeveelheid en afmetingen.
  
  
• LOPEND - Studie van kleine varianten (quasispecies) van mazelen, bof en rodehondvirussen.
  In vergelijking met het eerste rapport in juli 2018 (https://bit.ly/2UCC2iS) we hebben opdracht gegeven tot een diepgaande studie van de minder belangrijke varianten omdat niet alleen mutaties in verzwakte vaccinvirussen werden aangetroffen. Ook deze kwestie roept grote twijfels op over de werkzaamheid en veiligheid van het vaccin. Dit resultaat zal meer tijd vergen dan de andere rapporten omdat de verificatie van de sequenties van de mutanten handmatig moet worden uitgevoerd.
  
  
• LOPEND - Analyse van de interlaboratoriumbevestiging
  We hebben buitenlandse en nationale laboratoria geïdentificeerd waaraan we de analysereplicatie standaard hebben opgedragen. Dit resultaat is binnenkort beschikbaar.

Projecten die worden geëvalueerd

Studie van de potentie van vaccinantigenen: deze studie moet worden uitgevoerd in een door de regelgevende instanties erkend centrum voor preklinische studie van vaccins. Het doel is om te verifiëren of de vaccinantigenen in staat zijn om specifieke antilichamen te produceren of eraan te binden (er wordt theoretisch aangenomen dat deze antilichamen beschermend zijn, maar deze analyse laat ons niet toe om te bewijzen dat het vaccin in staat is om tegen de ziekte te beschermen). De kosten van deze stap kunnen relevant zijn, dus het project is momenteel slechts een hypothese.

Download link: CORVELVA-Report-on-the-resultaatgericht obtained.pdf

Vertaald door CLiVa-team - www.clivatoscana.com