Inleiden

Allereerst willen we de zeer nuttige opmerkingen bedanken van degenen die de resultaten van de analyses hebben bekeken, uitgevoerd in het kader van wetenschappelijke onderzoeksactiviteiten, met betrekking tot de Priorix tetra- en Infanrix Hexa-producten. De blootgelegde kritieke kwesties waren in feite zeer nuttig om technisch-wetenschappelijke integraties toe te voegen die het verrichte werk konden verduidelijken. Wij geloven dat alleen via een gezonde gemeenschap van wetenschappelijke visies conclusies kunnen worden getrokken over de verkregen gegevens die nuttig kunnen zijn voor de hele wetenschappelijke gemeenschap en voor de mensen die zich daarop wenden.

1. Stand van zaken

De voorbereidende onderzoeken (screening niet onderworpen aan bevestiging) van het biomoleculaire, metabolomische en proteomische profiel, uitgevoerd op de Priorix Tetra- en Infanrix Hexa-producten, hebben geleid tot een samenstelling die is samengevat in de volgende punten:

1. Aanwezigheid van verschillende analytische signalen die niet kunnen worden geassocieerd met bekende verbindingen via zoekopdrachten in Metlin-databases ^1-2 en KEGG ³. Daarom ontstond een beeld dat gepaard ging met een aanzienlijke complexiteit in de samenstelling van commerciële producten.
2. Aanwezigheid van niet-aangegeven eiwitten in de bijsluiter in het Priorix Tetra-product. Dit laatste kan mogelijk worden geassocieerd met residuen van het productieproces
3. Niet-detectie van de antigenen die in het Infanrix Hexa-product zijn aangegeven. De analysetechniek bestond uit enzymatische digestie met trypsine geassocieerd met massaspectrometrische technieken. ^4-5

Deze gegevens hebben verschillende opmerkingen opgeleverd, met name ten aanzien van punt C - De detectie van eiwitten gebeurt in feite met een standaardbenadering, die al meer dan 10 jaar internationaal wordt erkend ⁴spijsvertering door het trypsine-enzym ⁴. De aldus verkregen peptiden worden chromatografisch gescheiden en geanalyseerd met massaspectrometrie ^4-5. De belangrijkste observatie was inherent aan het feit dat er in de vaccins op aluminium gebaseerde adjuvansverbindingen zijn die mogelijk het enzymatische spijsverteringsproces kunnen remmen.

De verkregen gegevens hebben het vervolgens mogelijk gemaakt om inhoudelijke verduidelijkingen te verschaffen, met name met betrekking tot het in punt c.

2. Nieuwe inzichten en analyses

2.1 Verdere informatie over de analyse van het Infanrix Hexa-product

Alvorens verder te gaan met de illustratie van de nieuwe verkregen gegevens betreffende de Hexyon en Gardasil 9-vaccins, is het noodzakelijk om de vraag te beantwoorden die inherent is aan de gestelde twijfel over de remming van de proteolytische activiteit van trypsine veroorzaakt door de aanwezigheid van op aluminium gebaseerde adjuvantia. in het Infanrix Hexa-vaccin. In dit verband moet worden gespecificeerd dat een spijsverteringscontrole altijd aanwezig is in het tryptische digestaat. In feite heeft de trypsine die wordt gebruikt om de spijsvertering uit te voeren, hoewel ontworpen om autolyse te voorkomen, een klein percentage van de laatste die in het geval van enzymatische activiteit leidt tot het verkrijgen van het fragment met m / z 842 en de volgende peptidesequentie : VATVSLPR. Dit fragment werd feitelijk gedetecteerd in het tryptische digestaat van het Infanrix Hexa-product als verifieerbaar door het ionextractiechromatogram (figuur 1).

Figuur 1: Ionenextractiechromatogram geassocieerd met het ion bij m / z-verhouding 842 gedetecteerd in het monster met betrekking tot de batch van het Infanrix Hexa-product (batchnummer A21CD072D).

Bovendien wordt een externe controle uitgevoerd door hemoglobine te verteren, om de goedheid van de gebruikte partij trypsine verder te verifiëren. Hemoglobine, geanalyseerd in het analysegedeelte waarin het product werd gevolgd, werd herkend met een significante statistische score (loge <-100). Deze gegevens maakten het mogelijk om het feit te bevestigen dat de enzymactiviteit aanwezig was.

2.2 Nieuwe analyses met betrekking tot Hexyon- en Gardasil-producten

De analyse van de Hexyon- en Gardasil 9-producten leidde tot de detectie van complexe moleculaire profielen. In dit geval werd echter de aanwezigheid van de meeste in de bijsluiter vermelde antigenen gedetecteerd. Ze werden gedetecteerd door te werken met tryptische digestie en in aanwezigheid van adjuvantia. Dit feit versterkt verder het bewijs dat de tryptische digestiereactie niet wordt geremd in aanwezigheid van adjuvantia.

In het geval van de Hexyon- en Gardasil 9-vaccins werd de complexiteit van het moleculaire profiel voornamelijk toegeschreven aan de aanwezigheid van verschillende soorten, met een laag molecuulgewicht, niet identificeerbaar via de Metlin-referentiedatabases ^1-2 en KEGG ³.

3. Conclusies en slotoverwegingen

De uitgevoerde analyses leidden tot de volgende conclusie:

1. Het moleculaire profiel van de geanalyseerde vaccins is over het algemeen complex en grotendeels onbekend.
2. Er zijn eiwitverontreinigingen, niet vermeld in de bijsluiter, waarvan de samenstelling variabel is.
3. In verschillende gevallen werden de in de bijsluiter aangegeven antigenen niet gedetecteerd. Dit feit kan aan verschillende factoren worden toegeschreven. Onder deze laatste kunnen we de gevoeligheid van de gebruikte methode beschouwen. We denken echter dat we het fenomeen van remming van de spijsvertering kunnen uitsluiten vanwege de aanwezigheid van adjuvantia in de formulering van het vaccin. In feite wordt de enzymatische activiteit hoofdzakelijk bevestigd door de aanwezigheid van tryptische autolysefragmenten, in de oplossingen van de verteerde vaccins (interne controle).

4. Toekomstige studies

Verdere studies zullen worden uitgevoerd als onderdeel van de onderzoeks- en ontwikkelingsactiviteiten gericht op het onderzoeken van de volgende aspecten:

1. macromoleculaire samenstelling geassocieerd met vaste residuen aanwezig in vaccins (MALDI TOF MS-analyse); ⁵
2. evaluatie van de concentratie van metalen in de producten.
3. Tweede niveau-analyse om de aanwezigheid van toxische verbindingen in de screeningsfase te bevestigen. Hun concentratie zal daarom gerelateerd zijn aan hun toxiciteit op basis van wat wordt vermeld in de internationale veiligheidsinformatiebladen. De analyses op het tweede niveau zullen worden uitgevoerd in overeenstemming met de Europese richtlijn EU 2002/657 / EG die nuttig is om hoge kwaliteitsnormen in de massaspectrometrische sector te garanderen. ⁶

in geloof
d .ssa Loretta Bolgan

5. Bibliografische referenties

1. Autenhahn R, Cho K, Uritboonthai W, Zhu Z, Patti G, Siuzdak G (september 2012). "Een versnelde workflow voor niet-doelgerichte metabolomics met behulp van de METLIN-database". Natuurbiotechnologie. 30: 826–828. doi: 10.1038 / nbt.2348. PMC 3666346. PMID 22965049.
2. Smith CA, I'Maille G, Want EJ, Qin C, Trauger SA, Brandon TR, Custodio DE, Abagyan R, Siuzdak G (december 2005). "METLIN: een metaboliet-massaspectrale database" (PDF). Ther Drug Monit. 27 (6): 747-51. doi: 10.1097 / 01.ftd.0000179845.53213.39. PMID 16404815.
3. Kanehisa M (2013). "Chemische en genomische evolutie van enzymgekatalyseerde reactienetwerken". FEBS Lett. 587 (17): 2731-7.
4. Cristoni S, Bernardi LR. "Bio-informatica in massaspectrometrie data-analyse voor proteomics studies." Expert Rev Proteomics. December 2004; 1 (4): 469-83.
5. Cristoni S, Bernardi LR. "Ontwikkeling van nieuwe methodologieën voor de massaspectrometrische studie van bio-organische macromoleculen." Massaspectrom rev. 2003 nov-dec; 22 (6): 369-406.
6. Cristoni S, Dusi G, Brambilla P, Albini A, Conti M, Brambilla M, Bruno A, Di Gaudio F, Ferlin L, Tazzari V, Mengozzi S, Barera S, Sialer C, Trenti T, Cantu M, Rossi Bernardi L, Noonan DM. "SANIST: optimalisatie van een technologie voor de identificatie van verbindingen op basis van de richtlijn van de Europese Unie met toepassingen in forensische, farmaceutische en voedselanalyses." J. Mass Spectrom. Januari 2017; 52 (1): 16-21. doi: 10.1002 / jms.3895.

Download link: CORVELVA-Report-techniek-Finale.pdf