We willen de situatie samen met u inventariseren. Van juli 2018 tot vandaag zijn 8 maanden verstreken en in deze maanden hebben we buitengewoon bevredigende resultaten bereikt. We hebben een gepresenteerd onderzoeksprogramma en met betrekking tot de analyse van de vaccins kunnen we een eerste punt maken van de situatie, met de behaalde doelstellingen, die in de voltooiingsfase en die nog in het programma staan.

We beginnen deze update door te zeggen dat de analyses, standaard, van 2 verbindingen voor elk vaccin zijn bevestigd, met behulp van gecertificeerde controlenormen met een concentratie in de orde van microgram / ml. De verbindingen die we hebben gekozen, behoren tot de stoffen die bekend staan ​​om hun kritische gevarenprofiel. We hebben het over een cumulatieve hoeveelheid, dat wil zeggen in totaal tussen die welke als identiteit zijn bevestigd en die die moeten worden geïdentificeerd, die kan worden geschat in de orde van 50 microgram / ml, in tegenstelling tot de EMA / FDA-richtlijnen.

Deze bevestigingen gaven positieve resultaten, daarom bevestigen ze de analysemethode volledig! De waargenomen verontreinigingen zijn waarschijnlijk te wijten aan verschijnselen en variabelen die verband houden met het productieproces. Wat tijdens de studies is waargenomen, is een langetermijnvariatie van deze samenstelling die leidt tot de veronderstelling dat er processen zijn die moeilijk te controleren zijn binnen het totale proces van het verwerken van het product.

De uitgevoerde analyses maakten het mogelijk om de volgende stappen af ​​te ronden:

• Beoordeling van de conformiteit van de samenstelling zoals aangegeven in het vaccininformatieblad
• Screening van chemische, eiwit / peptide- en genetische materiaalbesmettingen
• Bevestigingsstudie van doelverbindingen (chemicaliën en eiwitten) met gecertificeerde controlenormen

De volgende vaccins zijn "volledig" geanalyseerd:

• Infanrix Hexa - GlaxoSmithKline Biologicals sa
• Priorix Tetra - GlaxoSmithKline SpA
  
• Hexyon - Sanofi Pasteur Europa
• Gardasil 9 - MSD-vaccins

Deze andere vaccins werden geanalyseerd als initiële screening:

• Mazelenvaccin levend BP - Poonawalla Group (Profarma AG, Baar)
• MMR vax Pro - MSD Vaccins, Frankrijk
• PolioInfanrix - GlaxoSmithKline, België
• Fluad - Seqirus Srl, Siena
• Vivotif - PaxVax, Verenigd Koninkrijk

Gebruikte technologieën

Het onderzoek was geformuleerd op:

Analyse van onzuiverheden en chemische en eiwitverontreinigingen

• Het LC-SACI / ESI-MS-analysesysteem dat is gekoppeld aan het innovatieve SANIST-platform werd zowel gebruikt voor het uitvoeren van een eerste identificatieonderzoek op de interessante vaccins als voor bevestiging met de controlestandaarden, met een minimumlimiet tussen nanogrammen en microgram / dosis
• MALDI-TOF-MS-technologie is gebruikt om de onoplosbare macromoleculen in vaccins te bestuderen

Genetische materiaalanalyse

• Test op de aanwezigheid van nucleïnezuren (DNA / RNA) van menselijke en dierlijke oorsprong en van micro-organismen (virussen, bacteriën) met behulp van de Next Generation Sequencing-methode, waarmee de sequentie van het genetische materiaal in de vaccins op een zeer specifieke en nauwkeurige manier kon worden gekwantificeerd onderzocht

Kwantitatieve analyse van metalen

• ICP-MS-technologie heeft het mogelijk gemaakt om de metalen die aanwezig zijn in vaccins te kwantificeren met een minimumlimiet van 5 ng / dosis.

Analyse van chemische en eiwitverontreinigingen

Na een eerste screening die honderden chemische signalen in de vaccins identificeerde, bevestigingen werden uitgevoerd met standaard 2-verbindingen per vaccin, met behulp van gecertificeerde controlenormen, gekozen uit de normen die bekend staan ​​om hun kritische gevarenprofiel en niet-residuele hoeveelheid (zodat ze kunnen worden beschouwd als componenten van de vaccins, daarom moeten ze worden opgenomen in het technische gegevensblad en worden gekwantificeerd).

Deze bevestigingen hebben positieve resultaten opgeleverd, daarom bevestigen ze de analysemethode volledig. Voorlopig zijn ze om puur economische redenen op slechts twee verbindingen uitgevoerd, in feite is deze studie niet uitputtend omdat ze wordt beperkt door de aanzienlijke kosten van het onderzoek, maar we hebben ervoor gekozen om de normen te identificeren die de grootste impact hebben in termen van wettelijke beperkingen en het is ook waar dat dit soort grondig onderzoek is aan ons.

De waargenomen verontreinigingen zijn waarschijnlijk te wijten aan verschijnselen en variabelen die verband houden met het productieproces. Wat tijdens de studies is waargenomen, is een langetermijnvariatie van deze samenstelling die leidt tot de veronderstelling dat er processen zijn die moeilijk te controleren zijn binnen het totale proces van het verwerken van het product. Rekening houdend met de gebruikelijke analytische factoren, kan worden aangenomen dat de concentratie in de orde van microgram / ml is. Wat de cumulatieve hoeveelheid betreft, is het mogelijk om op basis van een semi-kwantitatieve evaluatie (aangezien de meeste verbindingen niet bekend zijn) te schatten dat de verontreinigingen in de orde van 50 μg / ml zijn. Dit is belangrijk omdat de EMA / FDA-richtlijn in dit opzicht duidelijk is. Verontreinigingen mogen niet aanwezig zijn (onder de detectielimiet) of, als ze aanwezig zijn, moeten ze goed gekarakteriseerd zijn en bewezen hebben dat ze geschikte methoden toepassen om ze zoveel mogelijk te verminderen. In ons geval liggen de verontreinigingen die we hebben gevonden niet onder de detectielimiet van het instrument (ng / ml) en daarom past de fabrikant naar onze mening geen zuiveringsmethoden toe. Wat betreft de aanwezigheid van onvoorziene virussen, het probleem bestaat niet, omdat ze volledig afwezig moeten zijn.

• LOPEND - De analyses in verband met de bevestiging van deze verbindingen zijn aan de gang.
  De verbindingen geïdentificeerd door normen zullen opnieuw worden bevestigd met dezelfde technologie in andere laboratoria. Een van de doelen die we onszelf hebben gesteld, is om deze actie te coördineren, ook door de steun van internationale verenigingen.
• LOPEND - Studie van de neerslagkinetiek van aluminiumgebonden antigenen.

Metagenomische analyse

• LOPEND - Analyse met aanvullende DNA- en RNA-controlenormen van een andere batch per vaccin.
  Sinds het begin van dit project is ons duidelijk geworden dat de analyses, om te voldoen aan de noodzakelijke vereisten voor de herhaalbaarheid en nauwkeurigheid van de gegevens, moesten worden uitgevoerd met geavanceerde instrumenten en controle op eventuele verschillen tussen de partijen en tussen verschillende partijen. Terwijl we doorgaan met het onderzoek, worden andere partijen continu geanalyseerd, uiteraard beperkt tot de kosten en beschikbaarheid van de producten.
• LOPEND - Sequentieanalyse van het foetale DNA-genoom van de MRC-5-cellijn.
  Reeds in de eerste screening hadden we de mogelijkheid om standaard te bevestigen dat de gebruikte diploïde lijnen MRC-5 waren, zoals vermeld in het gegevensblad. We willen de studie van deze cellijn verdiepen, ook omdat deze in aanzienlijke hoeveelheden en van absoluut aanzienlijke omvang aanwezig is.
• LOPEND - Studie van kleine varianten (quasispecies) van mazelen, bof en rodehondvirussen.
  In vergelijking met het eerste rapport van juli 2018 (https://goo.gl/cSspVH) we hebben opdracht gegeven tot de diepgaande studie van de minder belangrijke varianten omdat niet alleen mutaties van verzwakte vaccinvirussen werden aangetroffen. Dit element roept ook enorme twijfels op over de werkzaamheid en veiligheid van het vaccin. Het resultaat zal langer duren dan de andere rapporten omdat de verificatie van de sequenties van de verschillende mutanten handmatig moet worden uitgevoerd.
• LOPEND - Analyse van de interlaboratoriumbevestiging
  We hebben buitenlandse en nationale laboratoria geïdentificeerd waaraan we standaard de replicatie van de analyses hebben opgedragen. Dit resultaat is binnenkort beschikbaar.

Projecten die worden geëvalueerd

Onderzoek naar de potentie van vaccinantigenen: dit onderzoek moet worden uitgevoerd in een door erkende regelgevende instanties erkend centrum voor preklinisch onderzoek van vaccins. Het doel is om te verifiëren of de vaccinantigenen in staat zijn tot het produceren of binden aan specifieke antilichamen (er wordt theoretisch aangenomen dat deze antilichamen beschermend zijn, maar deze analyse laat niet toe om aan te tonen dat het vaccin in staat is om tegen de ziekte te beschermen). De kosten van deze stap kunnen aanzienlijk zijn, daarom is het project voorlopig hypothetisch.

Download link: CORVELVA-report-of-resultaatgericht ottenuti.pdf