Eindelijk zijn we hier - na bijna twee jaar - wordt de eerste peer-reviewed publicatie van onze analyses vrijgegeven en zullen er vele andere worden gepubliceerd.

Het doel van dit artikel is om de volgende punten samen te vatten: wat is er gepubliceerd, wat is de geldigheid ervan en waarom is het belangrijk voor ons onderzoek naar vaccins. Al deze argumenten zullen in de eerste pagina's op een informele en niet-technische manier worden behandeld, terwijl vanaf pagina 3 een technische studie zal plaatsvinden om de specialisten van deze sector in staat te stellen het artikel zelf te evalueren.

Het artikel gepubliceerd op "F1000 Research"¹ is het resultaat van het eerste onderzoek dat is uitgevoerd door een van de laboratoria die Corvelva Association heeft aangesteld om de analyses uit te voeren. We herinneren u eraan - omdat er meer dan twee jaar zijn verstreken sinds het begin van dit werk en veel andere resultaten zijn toegevoegd aan de eerste - dat het eerste grote probleem dat we moesten onderzoeken, was de abnormale hoeveelheid menselijk DNA in de geanalyseerde vaccins.

De eerste analyses toonden aan dat zowel de geanalyseerde quadrivalente MMRV-vaccins 1 tot 2.7 microgram / injectieflacon bevatten (zoals gepubliceerd in dit artikel) en we besloten om dergelijke resultaten openbaar en onmiddellijk te rapporteren, omdat eenvoudigweg niet werd verwacht dat een dergelijke hoeveelheid DNA kan in een vaccin aanwezig zijn.

Afgezien van de overwegingen en conclusies van de studie, die strikt technisch zijn en daarom alleen begrijpelijk voor degenen die werkzaam zijn op het gebied van metagenomisch onderzoek, wordt in de grafieken opgemerkt dat de twee vaccinmonsters een hoog percentage menselijke DNA-metingen bevatten naast die welke worden verwacht van het genoom van het waterpokkenvirus (humaan alfa-herpesvirus 3), de enige detecteerbare van de vier, aangezien een DNA-achtige analyse in het artikel werd gepresenteerd.

We willen er echter op wijzen dat de hoeveelheden DNA die zijn gevonden en bevestigd door dezelfde methode die nu hier wordt gevalideerd waren zelfs hoger: tot 3.7 microgram per injectieflacon, wat leidt tot een aanzienlijk verschil van batch tot batch. Sterker nog, in ons rapport van 22 december 2018² de resultaten verkregen uit de analyse van verschillende batches dan die besproken in dit artikel werden gerapporteerd, en vervolgens bevestigd door interlaboratoriumanalyse die nog in publicatie is.

Wat daarom in deze publicatie als van groot belang moet worden beschouwd, is dat het de methode valideert die we hebben gebruikt, geeft een belangrijk punt aan de discussies over het "type" van de uitgevoerde analyse, en als gevolg het bevestigt definitief alle studies die vervolgens zijn uitgevoerd met de NGS-methode: de diepgaande analyse van het type genetisch materiaal, de aanwezigheid van adventieve virussen, de grote afwezigheid van verzwakte virussen die aanwezig zouden moeten zijn en de hoeveelheid menselijk DNA die volledig uit de hand liep (ook omdat heel verschillend van monster tot monster) , de mutante populatie, fagen, DNA van andere soorten, enzovoort. Je kunt aAlle resultaten worden samengevat op onze website³. 

 Alles wat we de afgelopen jaren aan de kaak hebben gesteld, krijgt vanuit biologisch oogpunt, door de resultaten grondig te rapporteren aan de controleorganen, een relevantere wetenschappelijke connotatie (zelfs als we het nogmaals herhalen, het waren niet de peer-reviews die moesten zorgen, maar de gepresenteerde gegevens, zeer ernstig qua inhoud en hun mogelijke implicaties voor de menselijke gezondheid). Nu de publicatie van de methode is voltooid, zullen we echter de antwoorden eisen die we nog niet hebben gekregen.

Deze resultaten bevestigen zonder twijfel de aanwezigheid van foetaal DNA in Priorix-tetavaccins, in variabele hoeveelheden van batch tot batch, wat wijst op een slechte kwaliteitscontrole van deze farmaceutische producten.

We willen ook het rapport herinneren over de volledige MRC-5-genoomsequencing, gepubliceerd op de Corvelva-website op 27 september 2019⁴  toont de diepe modificatie van dit DNA, zelfs in genen die verband houden met de ontwikkeling van tumorziekten (deze gegevens zullen binnenkort ook worden gepubliceerd). Het vervuilende foetale DNA dat in alle geanalyseerde monsters in variabele (dwz ongecontroleerde) hoeveelheden wordt aangetroffen, is tot 300 keer hoger dan de limiet die door de EMA is opgelegd voor carcinogeen DNA (10 ng / dosis, wat overeenkomt met het DNA in ongeveer 1000 kankercellen, op basis van een statistische berekening, terwijl de voorzorgslimiet 100 pg / dosis is), een limiet die noodzakelijkerwijs ook moet worden toegepast op foetaal DNA dat onvermijdelijk het Priorix Tetra-vaccin besmet.

Bijgevolg moet dit vaccin als defect en potentieel gevaarlijk voor de menselijke gezondheid worden beschouwd, met name voor de pediatrische populatie, die vanwege de onvolwassenheid van de immuniteitssystemen veel kwetsbaarder is voor genetische en auto-immuunschade.

 Zoals verwacht, is het volgende deel van het artikel "technischer" en moeilijk te begrijpen voor niet-experts, daarom hebben we besloten, zelfs voor transparantiedoeleinden, om ook dit document bij te voegen "EMA Dossier - NGS Dossier Discussie over de resultaten van de vaccinkwaliteitsenquête". We moesten alleen het deel extraheren dat kon worden gepubliceerd, dat wil zeggen 50 pagina's van het dossier vergeleken met de 200 pagina's van de NGS, aangezien veel van de informatie die is vastgelegd en geregistreerd bij de regelgevende instanties vertrouwelijk moet blijven. De strikte wet van de wetenschap schrijft voor dat een stuk informatie alleen in een tijdschrift mag worden gepubliceerd als het origineel is en aangezien we ander werk in uitvoering hebben, willen we het niet in gevaar brengen.

EMA - NGS Dossier Discussie over de resultaten van het vaccinkwaliteitsonderzoek ". - https://bit.ly/342XKi7

Ten slotte willen we, om misverstanden te voorkomen, het deel van de "Financieringsverklaring" uit de bovengenoemde publicatie benadrukken:

"De B1- en B2-metagenomische sequencing werd gefinancierd door Corvelva (vzw, Veneto, Italië), onder een servicecontract met het laboratorium. Er was geen andere bijdrage betrokken bij de ondersteuning van het werk. De financiers hadden geen rol bij het ontwerp van de studie, het verzamelen en analyseren van gegevens, het besluit tot publicatie of het opstellen van het manuscript "

Bijgevoegd:

• Publicatie - Hou je van me? Effect van dekkingsvermindering op studies met sequentiebepaling van metagenoomgeweren
• CORVELVA-thread-NGS-EMA-eng
• Eerste peer-reviewed publicatie over MMRV-vaccins (Priorix Tetra)

In het artikel 'Hou je van me? Effect van dekkingsvermindering op studies met sequentiebepaling van metagenoom shotgun "

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7059852/

De auteurs gaan in op de technisch-methodologische vraag of het mogelijk is om een ​​massaal parallelle metagenomische benadering met een lage leesdekking te gebruiken om complexe biologische matrices te karakteriseren. Schattingen van diversiteit, soortenrijkdom en het vermogen om het metagenoom te reconstrueren de novo in termen van lengte en volledigheid worden berekend, om te begrijpen in hoeverre de afname in sequentiediepte, gevarieerd door willekeurig subsampling sequencing-metingen, de uiteindelijke resultaten kan beïnvloeden. De resultaten tonen aan dat de diversiteitsindices van complexe prokaryotische, eukaryotische en virale gemeenschappen nauwkeurig kunnen worden geschat met 500,000 metingen of minder, hoewel bijzonder complexe monsters mogelijk 1,000,000 metingen vereisen. Integendeel, een project dat de reconstructie van het metagenoom en de genen ervan vereist bevat vereist meer dan 1,000,000 metingen.

Onder de verschillende, en zeer verschillende van elkaar, complexe matrices onderworpen aan massale metagenomische analyse, werden twee biologische geneesmiddelen opgenomen, namelijk twee verschillende partijen levend verzwakt MPRV-vaccin dat werd gebruikt voor immunisatie tegen mazelen, bof, rubella en waterpokken bij kinderen. DNA werd uit de vaccins gehaald, genomische bibliotheken werden gebouwd met behulp van commerciële standaardprotocollen en massale sequencing werd uitgevoerd met Illumina-technologie.

Afgezien van de overwegingen en conclusies van het werk, die strikt technisch zijn en daarom alleen begrijpelijk voor degenen die onderzoek doen op het gebied van metagenomica, wordt wat wordt waargenomen in de cirkeldiagrammen in de 'Uitgebreide gegevens' (https://osf.io/wq395/ monsters B1 en B2) is dat werd vastgesteld dat de twee vaccinmonsters een hoog percentage menselijke DNA-metingen bevatten, naast die verwacht van het genoom van het waterpokkenvirus (humaan alfaherpes virussen 3), de enige detecteerbaar onder de vier, aangezien in het artikel een DNA-seq-type-analyse werd gepresenteerd.

71% van de metingen in de ene batch en 88% in de andere is van menselijke oorsprong, vermoedelijk afkomstig van de foetale cellijn MRC-5 (onthoud dat latere analyse bevestigde dat de lijn MRC5 is) waarin levende verzwakte rubella en waterpokkenvirussen zijn gegroeid tijdens vaccinbereiding. Bovendien is, zoals gebeurde in de verschillende batches van hetzelfde MPRV-vaccin die door Corvelva tussen 2017 en 2019 zijn getest, de hoeveelheid geëxtraheerd DNA in de orde van grootte van microgram.

In vaccinbatches getest met dezelfde protocollen en technologie vermeld in de materialen en methoden van het artikel, varieerden de gedetecteerde hoeveelheden van 1 tot bijna 3 microgram per injectieflacon, hoeveelheden variërend tussen batches, maar altijd significant.

B1 https://osf.io/86mbn/

B2 https://osf.io/dxayz/

In het rapport dat Corvelva op 22.12.2018 publiceerde ⁵werden de volgende resultaten gerapporteerd voor verdere partijen die werden geanalyseerd na de partijen die in het artikel zijn besproken, later bevestigd door interlaboratoriumanalyse die nog in de maak is.

Priorix Tetra-kavel. A71CB205A (juni 2018) - DNA-analyse

Priorix Tetra-kavel. A71CB256A (december 2018) –DNA-analyse

DNA-analyse

Meting van DNA-concentratie met QuBit-fluorometer toonde aan dat de partij A71CB205A in totaal 1.7 µg gDNA per dosis van 0.5 ml bevat, berekend als volgt: 9.41 ng / µl (concentratie bepaald bij QuBit) x 45 (uiteindelijk resuspendeervolume van DNA na extractie, uitgedrukt in microliter) x 4 (het uitgangsvolume dat wordt onderworpen aan de extractieprocedure is ¼ van het dosisvolume in de gehele injectieflacon van 0.5 ml).

De meting van DNA concentratie met QuBit fluorometer toonde aan dat de A71CB256 Veel bevat een totaal gDNA van 3.7 µg per dosis van 0.5 ml, berekend als volgt: 40.8 ng / µl (concentratie bepaald bij QuBit) x 55 (uiteindelijk resuspendeervolume van DNA na extractie uitgedrukt in microliter) x 5/3 (het startvolume dat wordt onderworpen aan de extractieprocedure is 300 µl op 500 µl suspensie ).

Het menselijke DNA dat in deze batch wordt gevonden, is ongeveer 8 tot 1 vergeleken met waterpokken-DNA (zie de volgende resultaten van de classificatie van DNA-seq-fragmenten, waaruit blijkt dat 88% van de totale gesequentieerde DNA-fragmenten van menselijke oorsprong zijn en 11% zijn van het genoom van het waterpokkenvirus).

Aangezien NGS een kwantitatieve technologie is, stelt fluorimetrische kwantificering van het totale uit het vaccin geëxtraheerde DNA (bv. Partij A71CB256A = 3.7 microgram per dosis), in combinatie met de overweging van relatieve kwantificering hierboven (8: 1), in staat om te zeggen dat de mens DNA zou ongeveer 2.9 microgram per dosis kunnen zijn, vergeleken met ongeveer 740 nanogram waterpokken-DNA. Dat is ook aannemelijk ten minste één deel van het DNA met hoog molecuulgewicht dat op gel wordt gezien, zou menselijk DNA met hoog molecuulgewicht kunnen zijn.

RNA-analyse

De hoeveelheid RNA opgenomen in de vaccinflacon lot A71CB256A bleek ongeveer 200 ng te zijn.

Het RIN gelijk aan 8 geeft een aan uitstekende kwaliteit RNA en een intact eukaryotisch RNA, aangezien zowel de 18S- als de 28S-pieken die typisch zijn voor eukaryoot RNA aanwezig zijn.

De antwoorden op onze vragen die in de loop van de tijd aan regelgevende instanties worden doorgestuurd, zijn buitengewoon belangrijk. Momenteel hebben de agentschappen de vragen over de resultaten van de volledige analyses die aan het EMA en de AIFA zijn verstrekt, nog niet beantwoord.

Uittreksel uit het antwoord van de EMA op onze vraag over de veiligheid van MRC-5-residuen in het Priorix®-tetavaccin (EMA-verzoekreferentie ask-43967 3 augustus 2018) - "Op basis van de gepubliceerde informatie bevat Priorix® Tetra virale stammen die afzonderlijk worden geproduceerd in kippenembryocellen (bof en mazelen) of in menselijke diploïde cellen MRC-5 (rubella en waterpokken). De cellijnen die voor Priorix® Tetra worden gebruikt, omvatten menselijke diploïde cellijnen die niet continu kunnen delen. Merk op dat volgens de Europese Farmacopee, de MRC-5-diploïde cellijnen zijn niet tumorverwekkend, zoals blijkt uit decennia van gebruik en controle, en daarom is de maximale limiet voor het DNA van MRC-5-cellen niet van toepassing "

Tot op heden is er geen bewijs geleverd (noch in termen van analysecertificaten voor de kwaliteit van het product, noch in wetenschappelijke referentieliteratuur voor de EMA) die garanderen dat het passend is om geen maximumlimiet toe te passen.

In de FDA-richtlijn "Leidraad voor de industrie: karakterisering en kwalificatie van celsubstraten en andere biologische materialen die worden gebruikt bij de productie van virale vaccins voor indicaties van infectieziekten"⁶ er wordt gesteld dat:

• een stam van diploïde cellen moet altijd diploïd blijven. Als deze kenmerken niet stabiel zijn, moet worden aangetoond dat instabiliteit de productie of de conformiteit van het product niet nadelig beïnvloedt.
• voor veelgebruikte menselijke diploïde celstammen, zoals MRC-5- en WI-38-cellen, is het meten van residuaal DNA mogelijk niet nodig omdat we het residuale DNA van deze menselijke diploïde cellen niet als een veiligheidsrisico beschouwen
• resterend DNA moet worden beperkt voor niet-tumorigene continue cellen, zoals TRUE-cellen met een laag aantal passages, minder dan 10 ng / dosis voor parenterale inoculatie zoals aanbevolen door de WHO

En de WHO-richtlijn "Bijlage 3 - Aanbevelingen voor de evaluatie van dierlijke celculturen als substraten voor de vervaardiging van biologische geneesmiddelen en voor de karakterisering van celbanken. Vervanging van bijlage 1 van de WHO-reeks van technische rapporten, n. 878 "voegt toe: (...) er is veel ervaring opgedaan met de cytogenetica van WI-38 en MRC-5 sinds de jaren 1960 en om deze ervaring te ondersteunen, worden de volgende artikelen vermeld:

• Jacobs JP. Bijgewerkte resultaten over de karyologie van de celstammen WI-38, MRC-5 en MRC-9. Ontwikkelingen in biologische standaardisatie, 1976, 37: 155–156.
• Jacobs JP. et al. Richtlijnen voor de acceptatie, het beheer en het testen van in serie gepropageerde menselijke diploïde cellen voor de productie van levende virusvaccins voor gebruik bij de mens. Journal of Biological Standardization, 1981, 9: 331–342.
• Petricciani JC et al. Karyologiestandaarden voor resusdiploïde cellijn DBS-FRhL-2. Journal of Biological Standardization, 1976, 4: 43–49.
• Schollmayer et al. Analyse met hoge resolutie en differentiële condensatie in RBA-gestreepte menselijke chromosomen. Human Genetics, 1981, 59: 187–193.
• Rønne M. Chromosoombereiding en bandtechnieken met hoge resolutie: een overzicht. Journal of Dairy Science, 1989, 72: 1363–1377.

Er kan duidelijk worden opgemerkt dat de referentieliteratuur die beweert dat de diploïde cellen die worden gebruikt voor de productie van vaccins veilig zijn vanuit het oogpunt van genetische stabiliteit, is achterhaald. Al 40 jaar geleden werden de eerste genetische afwijkingen, verwaarloosbaar geacht voor de veiligheid van vaccins, gevonden en uit wat wordt vermeld in de WHO-richtlijn, sindsdien zijn er geen updates gemaakt met de nieuwe sequencing-technologieën, met name in NGS, die bovendien economisch en snel, met als gevolg dat de vaccins worden toegediend decennia lang hebben de instanties de aanwezigheid van steeds meer progressief genetisch gemodificeerd DNA en in ongecontroleerde hoeveelheden toegestaan. Zie over dit onderwerp het rapport over de sequentiebepaling van het volledige MRC-5-genoom, gepubliceerd op de Corvelva-website op 27.09.2019, waarin de diepgaande modificatie van dit DNA ook zichtbaar is in genen die verband houden met de ontwikkeling van tumorpathologieën. (gegevens worden gepubliceerd)

Hieronder volgt een uittreksel uit de brief van Dr. T. Deisher, wereldexpert in het gebruik van stamcellen voor therapeutische doeleinden en gentherapie, waarin de bezorgdheid over de risico's van het gebruik van vaccins die met menselijke foetale celresten zijn besmet, wordt benadrukt. :

Dr. T. DEISHER (brief aan de gouverneurs - 8 april 2019) - (...) het injecteren van onze kinderen met menselijke foetale DNA-besmetting brengt het risico met zich mee om twee geconsolideerde pathologieën te veroorzaken:

• insertie-mutagenese: menselijk foetaal DNA wordt opgenomen in het DNA van het kind en veroorzaakt mutaties. Gentherapie met homologe kleine fragmenten-recombinatie heeft aangetoond dat hoeveelheden van slechts 1.9 ng / ml DNA-fragmenten bij 100% van de geïnjecteerde muizen resulteren in het inbrengen van stamcellen in het genoom. Het niveau van menselijke foetale DNA-fragmenten bij onze kinderen na vaccinatie met MMR-, VARIVAX- (waterpokken) of hepatitis A-vaccins bereikt niveaus boven 1.9 ng / ml.
• auto immuunziekte: menselijk DNA van de foetus stimuleert de reactie van het immuunsysteem om het lichaam van het kind aan te vallen.

Onze resultaten versterken de experimentele waarnemingen van Dr. Deisher aanzienlijk, vooral het feit dat het contaminerende foetale DNA dat aanwezig is in alle monsters die in variabele hoeveelheden zijn geanalyseerd (dus ongecontroleerd) tot 300 keer hoger dan de limiet die door de EMA is opgelegd voor het carcinogene DNA (10 ng / dosis, overeenkomend met het DNA in ongeveer 1000 kankercellen, verkregen op basis van een statistische berekening, terwijl de voorzorgslimiet 100 pg / dosis is) limiet die noodzakelijkerwijs ook moet worden toegepast op foetaal DNA dat onvermijdelijk de Priorix® Tetra.

Daarom moet dit vaccin als defect en potentieel gevaarlijk voor de menselijke gezondheid worden beschouwd, met name bij pediatrische patiënten, die vanwege onvolwassenheid in de herstelsystemen veel kwetsbaarder zijn voor genetische en auto-immuunschade.

1. https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate/analisi-metagenomiche-su-priorix-tetra.html
2. https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate.html
   https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate-en.html
3. https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate/sequenziamento-del-genoma-completo-di-mrc-5-contenuto-in-priorix-tetra.html
4. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7059852/
5. https://www.corvelva.it/speciale-corvelva/vaccinegate/analisi-metagenomiche-su-priorix-tetra.html
6. https://www.federalregister.gov/documents/2010/03/04/2010-4553/guidance-for-industry-characterization-and-qualification-of-cell-substrates-and-other-biological