Eerste intercollegiale publicatie over MPRV-vaccins (Priorix Tetra)

Corvelva-personeel Vaccineer Maart 31 2020

We zijn er eindelijk, na bijna twee jaar verschijnt de eerste publicatie in peer review van onze analyses en vele anderen zullen volgen.

Hier proberen we op deze eerste pagina's op een zeer discursieve en niet-technische manier samen te vatten: wat is gepubliceerd, welke validiteit het heeft en waarom het belangrijk is voor ons onderzoek naar vaccins.

(Aan de andere kant zijn pagina's 3 tot XNUMX gewijd aan een technische studie, waarbij de evaluatie van het artikel zelf wordt overgelaten aan degenen die in de sector werken)

Wat gepubliceerd op "F1000 Research" ¹ het is het resultaat van het eerste deel van het werk dat namens de Vereniging Corvelva is uitgevoerd door een van de laboratoria die verantwoordelijk zijn voor de analyses. Bedenk - omdat er meer dan twee jaar zijn verstreken sinds het begin van dit werk en veel andere resultaten zijn toegevoegd aan de eerste - dat de het eerste grote probleem dat we moesten onderzoeken, was de abnormale hoeveelheid menselijk DNA in de geanalyseerde vaccins.

In zowel de quadrivalente MPRV-vaccins die werden geanalyseerd, werden aanvankelijk hoeveelheden van 1 tot 2,7 microgram / injectieflacon gevonden (volgens de publicatie in kwestie), en dit leidde ertoe dat we dit resultaat openbaar en onmiddellijk rapporteerden, omdat er eenvoudigweg niet werd verwacht dat een deze hoeveelheid DNA was aanwezig in een vaccin.

Afgezien van de overwegingen en conclusies die het werk bereikt, die strikt technisch zijn en daarom alleen begrijpelijk voor degenen die onderzoek doen op het gebied van metagenomica, wordt in de grafieken opgemerkt dat de twee vaccinmonsters een hoog percentage van metingen van menselijk DNA naast de metingen die worden verwacht van het genoom van het waterpokkenvirus (humaan alfa-herpesvirus 3), alleen detecteerbaar van de vier, zoals een DNA-seq-analyse werd gepresenteerd in het artikel.
We willen echter benadrukken dat later de hoeveelheden DNA die daarmee zijn gevonden en bevestigd daarmee zijn bevestigd methode die nu hier is gevalideerd waren zelfs nog hoger: tot 3,7 microgram per injectieflacon, wat leidde tot een significant verschil tussen batch en batch.
In feite, in ons rapport dat op 22.12.2018 is gepubliceerd ² resultaten zijn gerapporteerd voor verdere loten geanalyseerd na die welke in het artikel zijn besproken, vervolgens verder bevestigd door interlaboratoriumanalyses die nog steeds worden gepubliceerd.

Wat ons daarom het meest interesseert in deze publicatie is dat het de gebruikte methode valideert, legt een belangrijk punt op de discussies over het "type" van de uitgevoerde analyses, en bijgevolg bevestigt resoluut al het werk dat daarna is gedaan met de NGS-methode: de inzichten over het type genetisch materiaal dat aanwezig is, de aanwezigheid van adventieve virussen, de grote afwezigheid van verzwakte virussen die in plaats daarvan aanwezig zouden moeten zijn en de hoeveelheid in plaats daarvan uit de hand (ook omdat het heel anders is van monster tot monster) van het aanwezige menselijke DNA, de mutante populatie , fagen, DNA van andere soorten en geleidelijk alle resultaten die u op onze site vindt samengevat. ³

Alles wat we, vanuit het oogpunt van biologische inhoud, de afgelopen jaren aan de kaak hebben gesteld door de resultaten slaafs aan de controleorganen te rapporteren, krijgt een meer relevante wetenschappelijke connotatie (zelfs als we het nogmaals herhalen, het waren niet de peer reviews die ons zorgen baarden maar de gepresenteerde gegevens, zeer ernstig in hun inhoud en in hun mogelijke implicaties voor de menselijke gezondheid). Nu de publicatie van de methode is voltooid, zullen we echter vragen om de antwoorden te verkrijgen die nog niet zijn binnengekomen.

Deze resultaten bevestigen overtuigend de aanwezigheid van foetaal DNA in Priorix tetra-vaccins, in hoeveelheden die variëren tussen de verschillende batches, wat wijst op een slechte kwaliteitscontrole van deze farmaceutische producten.

We herinneren ons ook het rapport over de sequentiebepaling van het volledige MRC-5-genoom dat op 27.09.2019 op de Corvelva-website is gepubliceerd. ⁴ waarin de diepgaande modificatie van dit DNA ook duidelijk is in genen die geassocieerd zijn met de ontwikkeling van tumorpathologieën (andere gegevens worden gepubliceerd).

Het contaminerende foetale DNA dat aanwezig is in alle monsters die in variabele hoeveelheden zijn geanalyseerd (dus ongecontroleerd) is tot 300 keer hoger dan de limiet die door de EMA is vastgesteld voor carcinogeen DNA (10 ng / dosis, overeenkomend met het DNA in ongeveer 1000 kankercellen, verkregen op basis van een statistische berekening, terwijl de voorzorgslimiet 100 pg / dosis) is, die noodzakelijkerwijs ook moet worden toegepast op foetaal DNA dat onvermijdelijk de Priorix Tetra verontreinigt.

Hieruit volgt dat dit vaccin als defect en potentieel gevaarlijk voor de menselijke gezondheid moet worden beschouwd, met name voor de pediatrische populatie die veel kwetsbaarder is voor genetische en auto-immuunschade als gevolg van onvolwassenheid in de opvangsystemen.

Zoals verwacht is het volgende "technischer" en moeilijker te begrijpen voor niet-professionals, daarom hebben we besloten, ook voor transparantie, om ook dit document aan het document toe te voegen "EMA - NGS Dossier Bespreking van de resultaten van het vaccinkwaliteitsonderzoek". We hoefden alleen het geopenbaarde deel te extrapoleren, meer dan 50 pagina's met dossiers in vergelijking met de 200 van de NGS, aangezien veel van de informatie die bij de regelgevende instanties is opgeslagen en geregistreerd, vertrouwelijk moet blijven. De strenge wet van de wetenschap vereist dat gegevens alleen in een tijdschrift worden gepubliceerd als ze niet zijn gepubliceerd en we, met verschillende andere publicaties in uitvoering, niet in gevaar willen brengen.

Om misverstanden te voorkomen, willen we tot slot uit de publicatie het deel van de "financieringsverklaring" vermelden:

“De metagenomische sequentiebepaling B1 en B2 werd gefinancierd door Corvelva (vzw, Veneto, Italië), als onderdeel van een servicecontract met het laboratorium. Er waren geen andere bijdragen betrokken bij de ondersteuning van het werk. De financiers speelden geen rol bij de opzet van de studie, bij het verzamelen en analyseren van de gegevens, bij het besluit tot publicatie of bij het opstellen van het manuscript. "

bijlagen:

In het artikel 'Hou je van me? Effect van dekkingsvermindering op studies met sequentiebepaling van metagenoom shotgun "

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7059852/

De auteurs pakken de technisch-methodologische vraag aan of het mogelijk is om een massale parallelle metagenomics-benadering te gebruiken met een lage leesdekking om complexe biologische matrices te karakteriseren. Er worden schattingen van diversiteit, soortrijkdom en het vermogen om het metagenoom de novo te reconstrueren in termen van lengte en volledigheid berekend, om te begrijpen hoeveel de afname van de sequentiediepte, gevarieerd door het willekeurig subbemonsteren van de sequentiemetingen, kan De resultaten laten zien dat de diversiteitsindices van prokaryote, eukaryote en virale complexe gemeenschappen nauwkeurig kunnen worden geschat met 500.000 metingen of minder, hoewel voor bijzonder complexe monsters 1.000.000 metingen nodig kunnen zijn. Integendeel, een project met betrekking tot de reconstructie van het metagenoom en de genen die het bevat, vereist meer dan 1.000.000 reads.

Onder de verschillende en zeer verschillende complexe matrices die werden onderworpen aan massieve metagenomische analyse, werden twee biologische geneesmiddelen opgenomen, namelijk twee verschillende partijen levend verzwakt MPRV-vaccin dat wordt gebruikt voor immunisatie tegen mazelen, bof, rubella en waterpokken bij kinderen. DNA werd geëxtraheerd uit de vaccins, genomische bibliotheken werden vervolgens gebouwd met behulp van commerciële standaardprotocollen en massale sequencing met Illumina-technologie werd uitgevoerd.

Afgezien van de overwegingen en conclusies die het werk bereikt, die strikt technisch zijn en daarom alleen begrijpelijk voor degenen die onderzoek doen op het gebied van metagenomica, wordt wat er wordt waargenomen in de cirkeldiagrammen in de 'Uitgebreide gegevens' (https://osf.io/wq395/ monsters B1 en B2) is dat de twee vaccinmonsters een hoog percentage menselijke DNA-metingen bleken te bevatten naast die verwacht van het genoom van het varicella-virus (humaan alfaherpesvirus 3), de enige detecteerbare van de vier, die in het artikel staat er werd een DNA-seq-analyse gepresenteerd.

71% van de metingen in de ene batch en 88% in de andere is van menselijke oorsprong, vermoedelijk afkomstig van de cellijn van foetale oorsprong MRC-5 (onthoud dat latere analyses hebben bevestigd dat de lijn MRC5 is) waarin levende verzwakte rubella- en waterpokkenvirussen worden gekweekt tijdens de vaccinbereiding. Bovendien is, zoals gebeurde in de verschillende partijen van hetzelfde MPRV-vaccin getest door Corvelva tussen 2017 en 2019, de hoeveelheid geëxtraheerd DNA in de orde van grootte van het microgram.

In de vaccinatieloten getest met dezelfde protocollen en technologie vermeld in de materialen en methoden van het artikel, varieerden de gedetecteerde hoeveelheden tussen 1 en bijna 3 microgram per injectieflacon, hoeveelheden variërend tussen de ene batch en de andere, maar altijd significant

Corvelva mprv1

B1 https://osf.io/86mbn/

Corvelva mprv1

B2 https://osf.io/dxayz/

In het rapport dat Corvelva op 22.12.2018 openbaar maakte, werden de volgende resultaten gerapporteerd verdere loten geanalyseerd na die welke in het artikel zijn besproken, vervolgens verder bevestigd door interlaboratoriumanalyse die nog wordt gepubliceerd:

Priorix Tetra-kavel. A71CB205A (juni 2018) - DNA-analyse

Corvelva mprv3

Priorix Tetra-kavel. A71CB256A (december 2018) - DNA-analyse

Corvelva mprv3

DNA-analyse

De meting van de concentratie van DNA met QuBit fluorimeter toonde aan dat lot A71CB205A een hoeveelheid bevat van 1.7 µg gDNA totalen per dosis van 0.5 ml, als volgt berekend: 9.41 ng / µl (concentratie bepaald bij QuBit) x 45 (uiteindelijk resuspendeervolume van DNA na extractie, uitgedrukt in microliter) x 4 (het startvolume dat wordt onderworpen aan de extractieprocedure is ¼ het volume van de dosis in de gehele injectieflacon gelijk aan 0.5 ml).

De meting van de concentratie van DNA met QuBit fluorimeter toonde aan dat lot A71CB256A een hoeveelheid bevat van gDNA van 3.7 µg totaal per dosis van 0.5 ml, berekend als volgt: 40.8 ng / µl (concentratie bepaald bij QuBit) x 55 (uiteindelijk resuspendeervolume van DNA na extractie uitgedrukt in microliter) x 5/3 (het uitgangsvolume dat wordt onderworpen aan de extractieprocedure is 300 µl van de 500 µl suspensie).

Het menselijke DNA dat in dit kavel wordt aangetroffen, heeft een relatieve verhouding van ongeveer 8 tot 1 in vergelijking met het waterpokken-DNA (zie de volgende resultaten van de classificatie van de DNA-seq-fragmenten, waaruit blijkt dat 88% van het totaal van de gesequentieerde DNA-fragmenten bestaat uit menselijke oorsprong en 11% van het varicella-virusgenoom). Aangezien NGS een kwantitatieve technologie is, stelt de fluorimetrische kwantificering van het totale DNA dat uit het vaccin is geëxtraheerd (bijvoorbeeld lot. A71CB256A = 3,7 microgram per dosis), in verband met de overweging van relatieve kwantificering hierboven (8: 1), ons in staat om te zeggen dat menselijk DNA kan bestaan 2,9 microgram per dosis, vergeleken met ongeveer 740 nanogram waterpokken-DNA. Dat is ook aannemelijk ten minste een deel van het hoog-moleculaire DNA dat op gel wordt gezien, kan menselijk DNA met hoog molecuulgewicht zijn.

RNA-analyse

La quantità di RNA in de injectieflacon van vaccinpartij A71CB256A bleek ongeveer te zijn 200ng.

Het RIN gelijk aan 8 duidt op een RNA van uitstekende kwaliteit en een intact eukaryoot RNA, aangezien zowel de 18S- als de 28S-pieken die typisch zijn voor eukaryotisch RNA aanwezig zijn.

De antwoorden op onze vragen die in de loop van de tijd naar de regelgevende instanties zijn gestuurd, zijn van groot belang. Momenteel hebben de agentschappen de vragen over de resultaten van de volledige analyses die aan het EMA en AIFA zijn geleverd, nog niet beantwoord.

Uittreksel uit het ema-antwoord op onze vraag over de veiligheid van mrc-5-residuen in het priorix-tetavaccin (EMA-verzoekreferentie ASK-43967 3 augustus 2018) - “Op basis van de gepubliceerde informatie bevat Priorix Tetra virale stammen die afzonderlijk worden geproduceerd in kippenembryocellen (bof en mazelen) of in menselijke diploïde cellen MRC-5 (rubella en waterpokken). De cellijnen die voor Priorix Tetra worden gebruikt, omvatten menselijke diploïde cellijnen die niet continu kunnen delen. Merk op dat, volgens de Europese Farmacopee, MRC-5-diploïde cellijnen niet tumorverwekkend zijn, zoals blijkt uit decennia van gebruik en controle, en daarom is een maximumlimiet voor het DNA van MRC-5-cellen niet van toepassing "

Tot op heden is er geen bewijs geleverd (noch in termen van analysecertificaten over de kwaliteit van het product, noch in wetenschappelijke referentieliteratuur voor de EMA) die garanderen dat het passend is om geen maximumlimiet toe te passen.

In de FDA-richtlijn "Leidraad voor de industrie: karakterisering en kwalificatie van celsubstraten en andere biologische materialen die worden gebruikt bij de productie van virale vaccins voor indicaties van infectieziekten" ⁶ naar verluidt:

een stam van diploïde cellen moet altijd diploïd blijven. Als deze kenmerken niet stabiel zijn, moet worden aangetoond dat instabiliteit de productie of conformiteit van het product niet nadelig beïnvloedt.
voor veelgebruikte menselijke diploïde celstammen, zoals MRC-5- en WI-38-cellen, is het mogelijk dat het meten van residuaal DNA niet nodig is omdat we het residuale DNA van deze menselijke diploïde cellen niet als een veiligheidsprobleem beschouwen
resterend DNA moet worden beperkt voor niet-tumorigene continue cellen, zoals laagdoorlaat VERO-cellen, minder dan 10 ng / dosis voor parenterale inoculatie zoals aanbevolen door de WHO

En in de WHO-richtlijn “Bijlage 3 - Aanbevelingen voor de evaluatie van dierlijke celculturen als substraten voor de productie van biologische medicijnen en voor de karakterisering van celbanken. Vervanging van bijlage 1 van de WHO-reeks van technische rapporten, n. 878 " ⁷ we voegen eraan toe: (...) sinds de jaren zestig is er veel ervaring opgedaan met de cytogenetica van WI-38 en MRC-5

en om deze ervaring te ondersteunen, worden de volgende artikelen vermeld:

Jacobs JP. Bijgewerkte resultaten over de karyologie van de celstammen WI-38, MRC-5 en MRC-9. Ontwikkelingen in biologische standaardisatie, 1976, 37: 155–156.
Jacobs JP. et al. Richtlijnen voor de acceptatie, het beheer en het testen van in serie gepropageerde menselijke diploïde cellen voor de productie van levende virusvaccins voor gebruik bij de mens. Journal of Biological Standardization, 1981, 9: 331–342.
Petricciani JC et al. Karyologiestandaarden voor resusdiploïde cellijn DBS-FRhL-2. Journal of Biological Standardization, 1976, 4: 43–49.
Schollmayer et al. Analyse met hoge resolutie en differentiële condensatie in RBA-gestreepte menselijke chromosomen. Human Genetics, 1981, 59: 187–193.
Rønne M. Chromosoombereiding en bandtechnieken met hoge resolutie: een overzicht. Journal of Dairy Science, 1989, 72: 1363–1377.

Er kan duidelijk worden opgemerkt dat de referentieliteratuur, om te beweren dat diploïde cellen die worden gebruikt voor de productie van vaccins, veilig zijn vanuit het oogpunt van genetische stabiliteit, het is achterhaald. Al 40 jaar geleden werden de eerste genetische afwijkingen gevonden, die als verwaarloosbaar werden beschouwd voor de veiligheid van vaccins, en van wat is gerapporteerd in de WHO-richtlijn, sindsdien zijn er geen updates gemaakt met de nieuwe sequencing-technologieën, met name in NGS, dat bovendien economisch is en snel, met als gevolg dat bij de toegediende vaccins al tientallen jaren is de aanwezigheid van steeds meer progressief genetisch gemodificeerd DNA in ongecontroleerde hoeveelheden toegestaan door instanties. Zie in dit verband het rapport over de sequentiebepaling van het volledige MRC-5-genoom dat op 27.09.2019 op de Corvelva-website is gepubliceerd. ⁸ waarbij de diepgaande modificatie van dit DNA ook duidelijk is in genen die geassocieerd zijn met de ontwikkeling van tumorpathologieën. (gegevens worden gepubliceerd)

Er wordt een uittreksel uit de brief van Dr. T. Deisher, wereldexpert in het gebruik van stamcellen voor therapeutische doeleinden en gentherapie, gerapporteerd, waarin de bezorgdheid over de risico's van het gebruik van met residuen besmette vaccins wordt benadrukt. van menselijke foetale cellen:

Dr. T. DEISHER (brief aan de heersers - 8 april 2019) ⁹ - (...) het injecteren van onze kinderen met menselijke foetale DNA-besmetting brengt het risico met zich mee dat twee bekende ziekten worden veroorzaakt:

insertionele mutagenese: menselijk foetaal DNA wordt opgenomen in het DNA van de baby en veroorzaakt mutaties. Gentherapie met homologe recombinatie van kleine fragmenten heeft aangetoond dat hoeveelheden van slechts 1,9 ng / ml DNA-fragmenten bij 100% van de geïnjecteerde muizen resulteren in het inbrengen in het genoom van stamcellen. Het niveau van menselijke foetale DNA-fragmenten bij onze kinderen na vaccinatie met MMR-, VARIVAX- (waterpokken) of hepatitis A-vaccins bereikt niveaus boven 1,9 ng / ml.
auto-immuunziekte: menselijk DNA van de foetus stimuleert de reactie van het immuunsysteem om het lichaam van de baby aan te vallen.

Onze resultaten versterken in hoge mate de experimentele waarnemingen van Dr. Deisher en vooral het feit dat het vervuilende foetale DNA dat aanwezig is in alle monsters die in variabele (dus ongecontroleerde) hoeveelheden worden geanalyseerd, tot 300 keer de EMA-limiet voor carcinogeen DNA (10 ng / dosis, overeenkomend met het DNA in ongeveer 1000 kankercellen, verkregen op basis van een statistische berekening, terwijl de voorzorgslimiet 100 pg / dosis is) limiet die noodzakelijkerwijs ook moet worden toegepast op foetaal DNA dat onvermijdelijk de Priorix verontreinigt Tetra.

WAT ZOEK JE?

populaire Tags

Vaccineer

Eerste intercollegiale publicatie over MPRV-vaccins (Priorix Tetra)

bijlagen:

In het artikel 'Hou je van me? Effect van dekkingsvermindering op studies met sequentiebepaling van metagenoom shotgun "

Priorix Tetra-kavel. A71CB205A (juni 2018) - DNA-analyse

Priorix Tetra-kavel. A71CB256A (december 2018) - DNA-analyse

DNA-analyse

RNA-analyse

Hoofdmenu

Nieuwste artikelen

Vaccinrapport 2021 - Postmarketingsurveillance in Italië

Schildpadden helemaal: wetenschap en mythen over vaccinatie

Honderd jaar geleden: anti-vaccinatiecompetities

Volg ons op

Corvelva-papieren